1、第十三章 莨菪烷類抗膽堿藥物的分析,學習要求,掌握莨菪烷類抗膽堿藥物的結構特征、理化性質與分析方法之間的關系,4,1,2,3,了解其他分析方法在莨菪烷類藥物分析中的應用,第一節(jié) 莨菪烷類藥物的結構和性質,顛茄生物堿的來源：從茄科植物，如顛茄、莨菪和曼陀羅等中提取的生物堿，由莨菪醇與不同有機酸所成的酯。,作用：具有對M受體阻斷作用,（一）典型藥物的結構 硫酸阿托品

2、 氫溴酸東莨菪堿 （atropine sulfate） ( Scopolamine hydrobromide）,第一節(jié) 莨菪烷類藥物的結構和性質,第一節(jié) 莨菪烷類藥物的結構和性質,氫溴酸山莨菪堿( Anisodamine hydrobromide）,

3、氫溴酸后馬托品( Hormatropine hydrobromide）,第一節(jié) 莨菪烷類藥物的結構和性質,樟柳堿 ( Anisodine ）,甲溴東莨菪堿( Methscopolamin Bromide ）,第一節(jié) 莨菪烷類藥物的結構和性質,（二）主要化學性質1. 水解性 阿托品和東莨菪堿分子結構中，具有酯的結構，易水解。以阿托品為例，水解生成莨菪醇(Ⅰ)和莨菪酸(Ⅱ)，其反應結構式: 2. 堿性 阿托

4、品和東莨菪堿結構中，五原脂環(huán)含有叔胺氮原子，較強的堿性，易于酸成鹽，如阿托品pKb1為4.353. 旋光性 氫溴酸東莨菪堿含有不對稱碳原子，左旋體比旋度為-24°至-27°。阿托品雖然含有不對稱碳原子，但外消旋化，無旋光性,,第二節(jié) 鑒別反應,,,,,,,,鑒別反應,1,2,3,4,5,托烷生物堿的鑒別反應（Vitaili反應）,與硫酸-重鉻酸鉀的反應,與生物堿顯色劑和沉淀劑的反應,色譜法,光譜鑒別法,,,,

5、,,,阿托品、莨菪堿等托烷類生物堿水解后生成莨菪酸，均可發(fā)生Vitaili反應,生成具有共軛結構的陰離子而顯深紫色,與發(fā)煙硝酸共熱，得到黃色三硝基衍生物，放冷，加醇制氫氧化鉀少許，即脫羧,一、托烷生物堿的鑒別反應（Vitaili反應）,第二節(jié) 鑒別反應,第二節(jié) 鑒別反應,氫溴酸山莨菪堿的鑒別 取本品約10mg，加發(fā)煙硝酸5滴，置水浴上蒸干，得黃色殘渣，放冷，加乙醇2~3滴濕潤，加固體氫氧化鉀一小粒，即顯深紫色。,,第二節(jié) 鑒別反應

6、,,二、與硫酸-重鉻酸鉀的反應,三、與生物堿顯色劑和沉淀劑的反應,阿托品＋氯化汞醇試液→黃色沉淀東莨菪堿＋氯化汞醇→白色復鹽沉淀,,氫溴酸東莨菪堿的鑒別,,即生成白色沉淀（與阿托品及后馬托品的區(qū)別）,,,取本品約10mg，加水1ml溶解后，置分液漏斗中,,,分取三氯甲烷液，置水浴上蒸干，殘渣中加二氯化汞的乙醇溶液1.5ml,,,加氨試液使成堿性后，加三氯甲烷5ml，搖勻,第二節(jié) 鑒別反應（例2）,第二節(jié) 鑒別反應,表13-2 常

7、用的生物堿沉淀試劑及反應Tab. 13-2 The precipitation reagents and reaction for testing alkaloids,第二節(jié) 鑒別反應,四、光譜鑒別法,,,通過比較λmax、λmin或吸收光譜的一致性進行鑒別，也可比較其吸光度或吸收系數(shù)的比值來鑒別,絕大多數(shù)生物堿原料藥都采用IR法鑒別,,,UV,IR,四、光譜鑒別法,氫溴酸東莨菪紅外光譜The infrared spectrum

8、of Scopolamine Hydrobromide,第二節(jié) 鑒別反應,第二節(jié) 鑒別反應c,,,色譜法一般用于已知生物堿的鑒別,,,,,TLC,HPLC,GC,PC,五、色譜法,,Ch.P氫溴酸山莨菪堿注射液TLC鑒別 取本品1ml，置水浴上蒸干。取殘渣與消旋山莨菪堿對照品，分別加甲醇制成10mg /ml的溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各10µl，分別點于同一氧化鋁（中性，活度Ⅱ-Ⅲ級）薄層板上，以三氯甲烷-無

9、水乙醇（95∶5）為展開劑，展開，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液-碘化鉀碘試液（1∶1）。供試品溶液所顯主斑點位置和顏色，應與對照品溶液的主斑點相同。,第二節(jié) 鑒別反應,第三節(jié) 特殊雜質與檢查,氫溴酸東莨菪堿中特殊雜質檢查,氫溴酸東莨菪堿來源： 茄科植物顛茄、白曼陀羅、莨菪中等提取（我國，白曼陀羅的干燥品：洋金花中提取東莨菪堿，制成氫溴酸鹽） 制備方法：,,第三節(jié) 特殊雜質與檢查,,,特殊雜質與檢查,取本

10、品0.50g，加水10ml溶解后，依法測定（附錄Ⅵ H），pH值應為4.0～5.5。－強酸弱堿,取本品0.15g,加水5ml溶解后，在15～20℃加高錳酸鉀滴定液(0.02mol/L)0.05ml，10分鐘內(nèi)紅色不得完全消失。－阿撲東莨菪堿、其他含有不飽和雙鍵的有機物質,取本品0.10g ，加水2ml 溶解后，分成兩等份：一份中加氨試液2～3滴，不得發(fā)生渾濁；另一份中加氫氧化鉀試液數(shù)滴，只許發(fā)生瞬即消失的類白色渾濁。－阿撲阿托品、顛茄堿

11、,,酸度,,易氧化物,,其他生物堿,一、酸性染料比色法的基本原理,,UV,,第四節(jié) 含量測定,應用示例,硫酸阿托品片的含量測定,精密量取對照品溶液和供試品溶液各2ml，分別置預先精密加入三氯甲烷10ml的分液漏斗中，各加溴甲酚綠溶液4ml，振搖提取后，靜置使分層；分取三氯甲烷液，照紫外-可見分光光度法，在420nm波長處分別測定吸光度，計算，即得。,第四節(jié) 含量測定,第四節(jié) 含量測定,有機試劑的選擇,水分的影響,水相最佳pH值的選

12、擇,酸性染料的選擇及其濃度,酸性染料中雜質的影響,酸性染料比色法的影響因素,水性最佳pH值：使得BH+和In-最多 酸性染料及其濃度：定量結合；對離子對的溶解性好；有較高的吸收度；足夠量即可 有機溶劑的選擇：提取效率高，氯仿最理想 水分的影響：影響結果，脫水劑或濾紙除去水分 酸性染料中的有色雜質：有機溶劑萃取除去,第四節(jié) 含量測定,第四節(jié) 含量測定,測定法 精密量取對照品溶液和供試品溶液各2ml，分別置預先精密加入三氯甲烷1

13、0ml的分液漏斗中，各加溴甲酚綠2.0ml，振搖提取兩分鐘后，靜止分層，分取澄清的三氯甲烷液，在420nm波長處分別測定吸光度，計算，并將結果與1.027相乘，即得本品（C17H23NO3）2·H2SO4·H2O相當標示量的百分含量。,百分標示量,式中Ax、AS分別為供試品和對照品溶液的吸光度； CS為對照品溶液的濃度mg/ml； m為樣品質量；為平均片重。1.027為（C17H23NO3）2·H2SO4&

14、#183;H2O與（C17H23NO3）2·H2SO4·H2O的質量換算系數(shù)。,Fig. 13-2 The UV-spectrum of atropine sulfate with BTB ions1.離子對 2.染料空白（對照品平行測定，空白吸收可被扣除）3.阿托品（水溶液在420nm附近無吸收）,第四節(jié) 含量測定,一、非水溶液滴定法,當HA酸性較強時，反應不能定量完成，必須除去或降低HA的酸性，使反應順利地完

15、成。,,游離堿類鹽,,被置換出的弱酸,,第四節(jié) 含量測定,供試品,+,冰醋酸,10ml~30ml,,若供試品為氫鹵酸鹽再加5%醋酸汞的冰醋酸液3ml~5ml,,,結果,,HClO4滴定,,空白試驗校正,指示劑,,堿性溶液pKb>10，冰醋酸中滴定突躍不明顯，需加入醋酐，使堿性增強，突躍更明顯,第四節(jié) 含量測定,,,,適用范圍廣,分離模式多樣,檢測手段多樣靈敏,選擇和專屬性強,分離速度快,重復性好,,HPLC優(yōu)點,各國藥典中采

16、用HPLC法對莨菪類生物堿的含量和有關物質進行直接分析測定的比例不斷增加。,第四節(jié) 含量測定,,,,色譜保留常常較弱，從而影響到它們的含量或有關物質HPLC測定的專屬性和準確度。,采用離子對高效液相色譜法，可以改善它們的色譜保留行為，并實現(xiàn)準確測定。,在反相液相色譜條件下呈離子狀態(tài)的藥物，如有機堿類、有機酸類等,調整流動相的pH，抑制它們的解離，以改變色譜保留行為。但并不都能獲得滿意的結果。,第四節(jié) 含量測定,,,,了解藥物在體內(nèi)數(shù)

17、量與質量的變化,獲得藥代參數(shù)和藥物轉化、代謝的方式、途徑等信息,有助于對所研究的藥物作出綜合評價,,概念：研究生物機體中藥物及其代謝物和內(nèi)源性物質的質與量變化規(guī)律的分析方法學,體內(nèi)藥物分析,通過分析手段,第五節(jié) 體內(nèi)藥物分析,,,,,,,,,,,,,,,,,,,去除蛋白質,綴合物的水解,液-液提取,固相提取,化學衍生化,,,,,,,,,,,,,,,1,2,3,4,5,生物樣品組成復雜，干擾雜質多，一般需經(jīng)分離、純化，排除干擾后才能進行測

18、定,第五節(jié) 體內(nèi)藥物分析,存在問題,解決辦法,,,,第五節(jié) 體內(nèi)藥物分析,,,,,,,復雜生物樣品中微量藥物定量測定專屬有效的方法,,色譜與光譜聯(lián)用技術,,集色譜的高分離效能和光譜的高專屬性與高靈敏度于一體,特點,作用,藥物代謝物定性鑒定和含量測定常用的方法,第五節(jié) 體內(nèi)藥物分析,第五節(jié) 體內(nèi)藥物分析,,,,,,,人血漿和皮下脂肪組織中東莨菪堿的測定,介紹莨菪烷類藥物的液-質聯(lián)用測定法,介紹生物樣品在體取樣的微透析技術,例,,實驗步

19、驟如下,第五節(jié) 體內(nèi)藥物分析,,,,,,FIRST,,SECOND,,THIRD,,FOURTH,,,,,受試者靜脈滴注氫溴酸東莨菪堿,15min后分不同時間點取血,精密量取0.2ml血漿并加入內(nèi)標,加入蛋白沉淀劑并調節(jié)pH值,,,,FIFTH,渦旋混勻后通過固相萃取,,,SIXTH,進樣,,,,,,,血漿中東莨菪堿的測定,第五節(jié) 體內(nèi)藥物分析,,皮下脂肪中東莨菪堿的測定,,微透析探針包埋在皮下脂肪組織的間隙內(nèi)，每間隔20分鐘獲取一次