基因槍和農(nóng)桿菌介導(dǎo)MiR396基因?qū)π←溒贩N的遺傳轉(zhuǎn)化.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、小麥?zhǔn)鞘澜缟献钪匾募Z食作物之一,與水稻等其它作物相比,其分子生物學(xué)研究相對困難與滯后。然近幾年在產(chǎn)量提高,品質(zhì)改善,抗逆性增強(qiáng)等方面的研究都取得一定進(jìn)展。microRNA是真核生物體內(nèi)普遍存在的一類非編碼小分子RNA,它們通過堿基互補(bǔ)配對的方式介導(dǎo)靶mRNA的降解或是阻遏靶mRNA的翻譯來參與基因的調(diào)控,從而影響植物的生長和發(fā)育。MiRNA也以不同的方式參與植物生物和非生物脅迫的逆境響應(yīng)。前人研究表明miR396不僅影響植物的葉長、分

2、蘗數(shù)、節(jié)間長、花粉量等農(nóng)藝性狀,還與植物抗旱、耐鹽密切相關(guān)。也有研究表明miR396與植物的春化作用有關(guān),對于一些需經(jīng)過低溫春化才能開花的植物在miR396基因的作用下不經(jīng)過此過程就能開花。為創(chuàng)制優(yōu)異的小麥育種新材料,提高小麥品種遺傳改良之效率,獲得不需經(jīng)過低溫春化就能開花的小麥植株。本研究利用基因槍和農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化法將來源于水稻的miR396基因轉(zhuǎn)入不同小麥品種中,以期獲得農(nóng)藝性狀或抗逆性優(yōu)良的轉(zhuǎn)基因株系,使miR396這一優(yōu)良

3、基因資源得到有效利用。主要研究結(jié)果如下:
  (1)基因槍法介導(dǎo)miR396轉(zhuǎn)基因小麥植株的獲得與鑒定
  以華麥2566、華麥2152、隴春23、科農(nóng)199和鄭麥9023為受體材料,用基因槍法將miR396基因轉(zhuǎn)化到以上小麥品種中。最終獲得39株小麥再生植株,其中包含6株華麥2566,18株科農(nóng)199,15株隴春23。經(jīng)過PCR初步檢測,共獲得7株陽性植株,其中有5株來源于科農(nóng)199,2株來源于隴春23。其他小麥品種的轉(zhuǎn)化

4、材料中均未檢測到陽性株系。
  (2)農(nóng)桿菌介導(dǎo)miR396轉(zhuǎn)基因小麥植株的獲得與鑒定
  以華麥2566、科農(nóng)199、隴春23、硬粒小麥品種LDN為受體材料,用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法將miR396基因轉(zhuǎn)入以上小麥品種中,一共獲得11株再生植株,但僅得到2株來源于硬粒品種LDN的陽性株系,這可能是陽性植株的花粉育性受到影響所致,現(xiàn)未獲得轉(zhuǎn)基因后代種子。同時(shí)觀察發(fā)現(xiàn)陽性植株分蘗數(shù)顯著減少,其育性及分蘗表型是否與miR396的導(dǎo)入有關(guān)還有

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