1、尿液檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)化、質(zhì)控進(jìn)展,曾 真,現(xiàn) 狀解決方案,第一章干化學(xué)檢測(cè)尿液有形成分質(zhì)控,檢測(cè)化學(xué)項(xiàng)目多、速度快；檢測(cè)是紅細(xì)胞、中性粒細(xì)胞的化學(xué)成分；質(zhì)控物為化學(xué)物質(zhì)，不是真實(shí)形態(tài)學(xué)成分；,現(xiàn) 狀,干化學(xué)的問(wèn)題,特異性不夠好；干擾物質(zhì)的影響不能質(zhì)控；許多有形成分不能檢測(cè)；本底干擾檢測(cè)結(jié)果：本底+尿液顏色干擾；尿液漏滴造成漏檢；干化學(xué)方法自身不能證實(shí)檢測(cè)的真實(shí)性；不符合ISO15189；只能是過(guò)篩檢測(cè)；

2、,問(wèn) 題,例：干化學(xué)對(duì)白細(xì)胞檢測(cè)的局限性,檢測(cè)粒細(xì)胞的酯酶淋巴細(xì)胞不能檢測(cè)干擾物質(zhì)： 慶大、先鋒、甲醛、膽紅質(zhì)等,對(duì) 策,鏡檢證實(shí)和檢測(cè)不能檢測(cè)的有形成分；使用特異性檢測(cè)方法檢測(cè)化學(xué)成分；改進(jìn)方法，減少本底干擾和漏檢；,第二章有形成分檢測(cè)儀器的質(zhì)控,有形成分檢測(cè)儀器技術(shù)不同質(zhì)控不同,流式：質(zhì)控物為特制顆粒物；機(jī)器視覺(jué)技術(shù)：紅細(xì)胞沒(méi)有質(zhì)控物的儀器,現(xiàn) 狀,第一節(jié) 流式技術(shù)儀器,質(zhì)控依據(jù)是血液分析質(zhì)控

3、物為特制顆粒，不是尿液有形成分，為替代品，與實(shí)際檢測(cè)無(wú)系統(tǒng)屬性；干擾物影響無(wú)法質(zhì)控和檢測(cè)；檢測(cè)錯(cuò)誤時(shí)檢測(cè)者無(wú)法獲悉；分類(lèi)計(jì)數(shù)無(wú)意義；實(shí)際意義是質(zhì)控計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性；,質(zhì)控依據(jù)和問(wèn)題,流式,,特制顆粒質(zhì)控物，實(shí)際檢測(cè)無(wú)系統(tǒng)屬性,,,,,,,,,流式,,無(wú)法質(zhì)控干擾錯(cuò)誤,結(jié)晶、酵母菌 誤識(shí)別為紅細(xì)胞,流式,,,標(biāo)記物,,,,,,,,,,,,,紅細(xì)胞,儀器不能審核,真菌,結(jié)晶,檢測(cè)錯(cuò)誤時(shí)儀器無(wú)法知道,流式,優(yōu)勢(shì)和不足,優(yōu)勢(shì)：

4、1、流式+圖像：實(shí)現(xiàn)儀器檢測(cè)驗(yàn)證功能； 2、圖像更直觀、可信；不足1、因?yàn)榕牟坏角逦鷪D片，所有圖像按相似性處理獲得，由儀器內(nèi)圖庫(kù)提供單一成分的圖片；2、拍不到清晰圖片，識(shí)別極易出錯(cuò)，驗(yàn)證功能打折扣；3、驗(yàn)證錯(cuò)誤導(dǎo)致提供圖片錯(cuò)誤，結(jié)果不正確；結(jié)論仍然不能代替鏡檢,數(shù)字圖像流式,（CLSI原NCCLS)尿液分析操作指南（第三版）,GP16-A3(2009),Number 4 GP16-A324 ©Clini

5、cal and Laboratory Standards Institute. All rights reserved.10.1.2 Urine Particle Analyzers64-68,Automated urine analyzers use various technologies to classify and enumerate particles in urine.Depending on the instrumen

6、t, the technologies incorporated can include impedance, digital imaging flow cytometry, flow cytometry, light scatter, dyes, fluorescence, or some combination thereof. Particles with like characteristics are then grouped

7、 and classified. The elements that are typically identified include RBC, WBC, epithelial cells (squamous and nonsquamous), casts (benign and pathologic), bacteria, sperm, mucus, crystals, and small round cells. Samples s

8、howing abnormalities, either laboratory-defined or as indicated by the analyzer, are then reviewed microscopically by a technologist. Negative samples may obviate the need for manual microscopy.,,,國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)（GP16-A3 2009年）給出的解

9、決對(duì)策,1、數(shù)字圖像流式細(xì)胞儀、流式細(xì)胞儀等 標(biāo)本不論是實(shí)驗(yàn)室認(rèn)為或儀器檢測(cè)異常時(shí)（Samples showing abnormalities, either laboratory-defined or as indicated by the analyzer,）必須用人工鏡檢方法重新檢測(cè)確認(rèn)。2、陰性結(jié)果可以免除鏡檢確認(rèn)。,國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的參考文獻(xiàn),64 Delanghe J. New screening diagnostic t

10、echniques in urinalysis. Acta Clin Belg. 2007;62:155-161.65 Ottiger C, Huber AR. Quantitative urine particle analysis: integrative approach for the optimal combination of automation with UF-100 and microscopic review wi

11、th KOVA cell chamber. Clin Chem. 2003;49:617-623.66 Delanghe JR, Kouri TT, Huber AR, et al. The role of automated urine particle flow cytometry in clinical practice. Clin Chim Acta.2000;301:1-18.67 Roggeman S, Zaman Z.

12、 Safely reducing manual urine microscopy analyses by combining urine flow cytometer and strip results. Am J Clin Pathol. 2001;116:872-878.68 Shayanfar N, Tobler U, von Eckardstein A, Bestmann L. Automated urinalysis: fi

13、rst experiences and a comparison between the Iris iQ200 urine microscopy system, the Sysmex UF-100 flow cytometer and manual microscopic particle counting. Clin Chem Lab Med.2007;45:1251-1256.,第二節(jié) 機(jī)器視覺(jué)技術(shù)儀器,質(zhì) 控 依 據(jù),機(jī)器視

14、覺(jué),方法學(xué)：顯微鏡鏡檢與人工顯微鏡鏡檢區(qū)別： 操作自動(dòng)化 前期儀器能智能識(shí)別計(jì)數(shù)尿液有形成分國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)：ISLH Recommended Reference Procedure for the Enumeration of Particles in Urine (2003),ISLH主要內(nèi)容,1、不離心尿液直接檢測(cè)，計(jì)數(shù)池體積達(dá)到6.4ul2、低倍鏡 觀察計(jì)數(shù)大型有形成分（上皮細(xì)胞、

15、管型）； 高倍鏡 觀察計(jì)數(shù)小型有形成分（細(xì)胞、真菌、結(jié)晶等）3、結(jié) 果 以“個(gè)/ul”報(bào)告。4、統(tǒng)計(jì)學(xué)精度 低倍：（管型和上皮）至少計(jì)數(shù)50個(gè) CV<14%； 高倍：（紅、白細(xì)胞等）至少計(jì)數(shù)200個(gè)，

16、 CV<7%；,一、標(biāo)準(zhǔn)鏡檢參考方法的檢測(cè)特點(diǎn),不離心尿液直接鏡檢 改變離心尿液沉渣鏡檢檢測(cè)體積：最大體積6.4ul(不是1ul) 目的：提高靈敏度，確保檢測(cè)準(zhǔn)確性 原因：不離心尿液直接鏡檢極易漏檢報(bào)告：個(gè)/ul,機(jī)器視覺(jué)技術(shù)采取的方法,檢測(cè)：不離心尿液直接檢測(cè)檢測(cè)體積：大于6.4ul（通過(guò)低倍鏡大面積掃描定位。高倍鏡跟蹤識(shí)別而實(shí)現(xiàn)） 實(shí)現(xiàn)：低

17、濃度不漏檢 靈敏度達(dá)到：1個(gè)細(xì)胞/ ul檢測(cè)報(bào)告：個(gè)/ul,必須有兩個(gè)鏡頭：高倍鏡和低倍鏡 兩個(gè)鏡頭觀察的內(nèi)容不同（大小不同） 兩個(gè)鏡頭觀察的范圍不同（體積范圍不同） 兩個(gè)鏡頭觀察的細(xì)節(jié)不同（分辨率不同）,二、標(biāo)準(zhǔn)鏡檢參考方法的基本要求：,采用兩個(gè)鏡頭：高倍鏡和低倍鏡檢測(cè)方式完全按照顯微鏡鏡檢方法,機(jī)器視覺(jué)技術(shù)采取的方法,,,,儀器工作流程

18、 完全參照人工鏡檢標(biāo)準(zhǔn)參考方法,進(jìn)樣,充池,低倍過(guò)篩（視野數(shù)可設(shè)置）,低倍定位 分類(lèi)計(jì)數(shù)（管型、上皮）,高倍識(shí)別分類(lèi)計(jì)數(shù),報(bào)告,清洗,,,,,,,陰性,陽(yáng)性,人工輔判,,,,統(tǒng)計(jì)學(xué)精度 低 倍：（管型和上皮）至少計(jì)數(shù)50個(gè)CV<14%；高 倍：（紅、白細(xì)胞等）至少計(jì)數(shù)200個(gè)， CV<7%；這是在有形成分濃度不低時(shí)候的理想統(tǒng)計(jì)學(xué)精度,三、標(biāo)準(zhǔn)鏡檢參考方法的理想

19、精密度,通過(guò) 低倍鏡：大面積掃描定位。 高倍鏡：跟蹤識(shí)別而實(shí)現(xiàn) 上海檢驗(yàn)中心檢測(cè)認(rèn)證：CV為4%臨界濃度：分布不均勻，檢測(cè)體積過(guò)大；,機(jī)器視覺(jué)技術(shù)采取的方法,機(jī)器視覺(jué)目前質(zhì)控的不足：,質(zhì)控物只有單一紅細(xì)胞；其他有形成分暫時(shí)沒(méi)有質(zhì)控商品，期待；所有的有形成分智能分類(lèi)計(jì)數(shù)水平有提升空間，在此期間人工審核不能少；標(biāo)準(zhǔn)圖庫(kù)建立和指導(dǎo)意義大，需要增加和加強(qiáng)；實(shí)際意義：質(zhì)控計(jì)數(shù)準(zhǔn)確性；分類(lèi)計(jì)數(shù)在人工審核后

20、才具有意義；,第三節(jié)數(shù)字圖像自動(dòng)化儀器如何達(dá)到人工鏡檢標(biāo)準(zhǔn),自動(dòng)化數(shù)字圖像儀器=人工鏡檢,條 件是否符合ISLH（2003年）的國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)條件；是否是使用的具有高、低倍鏡的顯微鏡; 拍攝圖像是否是真實(shí)顯微鏡下的實(shí)景？圖像經(jīng)過(guò)處理否？檢測(cè)靈敏度能否達(dá)到:3-10個(gè)細(xì)胞/ul;結(jié)果有人工審核；審核人員專(zhuān)業(yè)知識(shí)、經(jīng)驗(yàn)、能力、責(zé)任心；,儀器技術(shù)原因：主要是檢測(cè)靈敏度達(dá)不到要求，不能質(zhì)控；識(shí)別能力不理想，無(wú)法質(zhì)控；單鏡頭的

21、局限性，雖有圖像，小的看不清，全局面不夠；檢測(cè)體積達(dá)不到國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)要求，精確度較差；,問(wèn) 題,無(wú)質(zhì)控品的儀器,第四節(jié)如何能是尿液檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)和正確,如何能是尿液檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)和正確,按國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)文件 ISLH（2003）和GP16-A3 執(zhí)行，不折扣；尿液檢驗(yàn)必須包括：理想、化學(xué)和鏡檢；任何儀器檢測(cè)結(jié)果必須與人工鏡檢相符合；,總原則,非形態(tài)學(xué)自動(dòng)化儀器檢測(cè)的陽(yáng)性結(jié)果必須鏡檢復(fù)檢（按GP16-A3）；非形態(tài)學(xué)自動(dòng)化儀器干擾成分必須鏡檢區(qū)分

22、；自動(dòng)化儀器靈敏度必須達(dá)到： 3-10個(gè)細(xì)胞/ul干化學(xué)和流式結(jié)合再次過(guò)篩不科學(xué)；,如何能是尿液檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)和正確,流式,以ISLH(2003)考核；鏡檢自動(dòng)化儀器人工審核不能省略；鏡檢自動(dòng)化儀器靈敏度必須達(dá)到： 3-10個(gè)細(xì)胞/ul,如何能是尿液檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)和正確,形態(tài)學(xué)儀器,單鏡頭儀器 需要研究和證實(shí)的是小的有形成分是否能準(zhǔn)確識(shí)別和區(qū)分，同時(shí)檢測(cè)體積能否達(dá)到要求，