1、實驗三、飲料中咖啡因含量的高效液相色譜分析實驗三、飲料中咖啡因含量的高效液相色譜分析――――外標法定量外標法定量一、實驗目的一、實驗目的1進一步熟悉和掌握高效液相色譜議的結構。2鞏固對反相液相色譜原理的理解及應用。3掌握外標法定量及igin軟件繪制標準曲線。二、實驗原理二、實驗原理咖啡因又稱咖啡堿，屬于黃嘌呤衍生物，化學名為1，3，7－三甲基黃嘌呤，是從茶葉或咖啡中提取的一種生物堿。它能興奮大腦皮層，是使人精神亢奮?？Х纫蛟诳Х戎械暮?/p>

2、約為1.2％～1.8％，在茶葉中約為2.0％～4.7％?？蓸凤嬃?、止痛藥片等均含咖啡因。咖啡因的分子式為C8H10O2N4，結構式為：NNNNOOCH3H3CCH3在化學鍵合相色譜中，對于親水性的固定相常采用疏水性流動相，即流動相的極性小于固定相的極性，這種情況稱為正相化學鍵合相色譜法。反之，若流動相的極性大于固定相的極性，則稱為反相化學鍵合相色譜法，該方法目前的應用最為廣泛。本實驗采用反相液相色譜法，以C18鍵合相色譜柱分離飲料中的咖

3、啡因，紫外檢測器進行檢測，以咖啡因標準系列溶液的色譜峰面積對其濃度作標準曲線，再根據(jù)試樣中的咖啡因峰面積，由其標準曲線算出其濃度。三、實驗儀器和試劑三、實驗儀器和試劑1.Agilent1100和Agilent1200高效液相色譜儀2.咖啡因（AR），超純水由純水機制得，甲醇為色譜純，配溶液的甲醇為分析純。3.咖啡因標準溶液的配制（1）標準貯備液配制含咖啡因1000ugmL的甲醇溶液，備用。（2）標準系列溶液用上述貯備液配置含咖啡因20u

4、gmL，40ugmL，80ugmL，160ugmL，320ugmL的甲醇溶液，備用。記錄并積分色譜圖。13.打印色譜圖。14.待所有樣品分析完后，單擊Pump圖標，進入Pump編輯畫面，準備清洗儀器，本實驗用0.5mLmin的甲醇清洗儀器30min，若實驗過程用到酸或緩沖鹽做流動相，須先用0.5mLmin水清洗儀器60min，再用0.5mLmin的甲醇清洗儀器30min。15.當儀器沖洗干凈后，單擊工作站畫面的Off按鈕，關泵，退出化學

5、工作站，關掉BootpServer窗口，關閉計算機（用shutdown關），最后從下往上關掉LC電源開關。再關總電源。16.實驗結束后做好儀器使用情況登記，經(jīng)實驗指導老師簽名后方可離開實驗室。六、實驗數(shù)據(jù)及處理六、實驗數(shù)據(jù)及處理1.處理色譜數(shù)據(jù)，將標準溶液及試樣中咖啡因的保留時間及峰面積列于表中。保留時間tRmin峰面積AmVs標準溶液20ugmL標準溶液40ugmL標準溶液80ugmL標準溶液160ugmL標準溶液320ugmL可口可