1、二基因：儲存有功能的蛋白質(zhì)多肽鏈或基因：儲存有功能的蛋白質(zhì)多肽鏈或RNA序列信息，以及表達這些信息所必需的全部核苷序列信息，以及表達這些信息所必需的全部核苷酸序列所構(gòu)成的遺傳單位。酸序列所構(gòu)成的遺傳單位。結(jié)構(gòu)基因：基因中編碼結(jié)構(gòu)基因：基因中編碼RNA或蛋白質(zhì)的或蛋白質(zhì)的DNA序列。序列?；蚪M：細(xì)胞或生物體中一套完整單倍體的遺傳物質(zhì)的總稱基因組：細(xì)胞或生物體中一套完整單倍體的遺傳物質(zhì)的總稱原核生物的結(jié)構(gòu)基因：是連續(xù)的，原核生物的結(jié)構(gòu)基因

2、：是連續(xù)的，RNA合成不需要剪接加工。合成不需要剪接加工。真核生物結(jié)構(gòu)基因：由外顯子和內(nèi)含子組成，編碼序列不連續(xù)，為斷裂基因真核生物結(jié)構(gòu)基因：由外顯子和內(nèi)含子組成，編碼序列不連續(xù)，為斷裂基因順式作用元件：順式作用元件：1.啟動子和上游啟動子元件啟動子和上游啟動子元件2.反應(yīng)元件反應(yīng)元件3.增強子增強子4.Poly(A)加尾信號加尾信號病毒基因組：病毒基因組：1.不同病毒基因組大小相差較大不同病毒基因組大小相差較大2.不同病毒基因組可以是

3、不同結(jié)構(gòu)的核酸不同病毒基因組可以是不同結(jié)構(gòu)的核酸3.除逆轉(zhuǎn)錄病毒外，為單倍體基因組除逆轉(zhuǎn)錄病毒外，為單倍體基因組4.病毒基因組有的是連續(xù)的，有的分節(jié)段病毒基因組有的是連續(xù)的，有的分節(jié)段5.有的基因有的基因有內(nèi)含子有內(nèi)含子6.病毒基因組大部分為編碼序列病毒基因組大部分為編碼序列7.功能相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄為多順反子功能相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄為多順反子mRNA8.有基有基因重疊現(xiàn)象因重疊現(xiàn)象原核生物基因組的結(jié)構(gòu)特點：原核生物基因組的結(jié)構(gòu)特點：1.基因組由一條

4、環(huán)狀雙鏈基因組由一條環(huán)狀雙鏈DNA組成；組成；2.只有一個復(fù)制起始點；只有一個復(fù)制起始點；3.大多數(shù)結(jié)構(gòu)基因組成操縱子結(jié)構(gòu)；大多數(shù)結(jié)構(gòu)基因組成操縱子結(jié)構(gòu)；4.結(jié)構(gòu)基因無重疊現(xiàn)象；結(jié)構(gòu)基因無重疊現(xiàn)象；5.無內(nèi)含子，轉(zhuǎn)錄后不需要剪接；無內(nèi)含子，轉(zhuǎn)錄后不需要剪接；6.基因組中編碼區(qū)大于非編碼區(qū)基因組中編碼區(qū)大于非編碼區(qū)7.重復(fù)基因少，結(jié)構(gòu)基因一般為單拷貝，重復(fù)基因少，結(jié)構(gòu)基因一般為單拷貝，rRNA的基因有多拷貝；的基因有多拷貝；8.有編碼同工

5、酶的等基因；有編碼同工酶的等基因；9.基因組中存在可移動的基因組中存在可移動的DNA序列；序列；10.非編碼區(qū)主要是調(diào)控序列非編碼區(qū)主要是調(diào)控序列真核基因組的結(jié)構(gòu)特點：真核基因組的結(jié)構(gòu)特點：1.每一種真核生物都有一定的染色體數(shù)目；每一種真核生物都有一定的染色體數(shù)目；2.遠(yuǎn)大于原核基因遠(yuǎn)大于原核基因組，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，基因數(shù)；組，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，基因數(shù)；3.真核生物基因轉(zhuǎn)錄為單順反子；真核生物基因轉(zhuǎn)錄為單順反子；4.有大量重復(fù)序列有大量重復(fù)序列5.真

6、核真核基因為斷裂基因基因為斷裂基因6.非編碼序列多于編碼序列非編碼序列多于編碼序列7.功能相關(guān)基因構(gòu)成各種基因家族。功能相關(guān)基因構(gòu)成各種基因家族。五基因表達：生物基因組中結(jié)構(gòu)基因所攜帶的遺傳信息，經(jīng)過轉(zhuǎn)錄、翻譯等一系列過程，合基因表達：生物基因組中結(jié)構(gòu)基因所攜帶的遺傳信息，經(jīng)過轉(zhuǎn)錄、翻譯等一系列過程，合成具有特定的生物學(xué)功能和生物學(xué)效應(yīng)的蛋白質(zhì)的全過程。成具有特定的生物學(xué)功能和生物學(xué)效應(yīng)的蛋白質(zhì)的全過程?；虮磉_的調(diào)控基因表達的調(diào)控：機

7、體各種細(xì)胞內(nèi)相同的結(jié)構(gòu)基因，根據(jù)機體的生長、發(fā)育、繁殖及環(huán)境：機體各種細(xì)胞內(nèi)相同的結(jié)構(gòu)基因，根據(jù)機體的生長、發(fā)育、繁殖及環(huán)境變化的需要，有規(guī)律的選擇性、程序性、適度地表達，以適應(yīng)環(huán)境，發(fā)揮其生理功能。變化的需要，有規(guī)律的選擇性、程序性、適度地表達，以適應(yīng)環(huán)境，發(fā)揮其生理功能。乳糖操縱子的調(diào)控機制：乳糖操縱子的調(diào)控機制：1.乳糖操縱子的負(fù)調(diào)控乳糖操縱子的負(fù)調(diào)控2.乳糖操縱子的結(jié)構(gòu)乳糖操縱子的結(jié)構(gòu)3.乳糖操縱子的正調(diào)控乳糖操縱子的正調(diào)控4.

8、乳糖操縱子的復(fù)合調(diào)控乳糖操縱子的復(fù)合調(diào)控操縱子：由多順反子轉(zhuǎn)錄單位與其調(diào)控序列構(gòu)成多順反子：多個功能相關(guān)的結(jié)構(gòu)基因串聯(lián)成一個轉(zhuǎn)錄單位，由同一調(diào)控序列進行轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)從而實現(xiàn)協(xié)同表達反式作用因子：能識別和結(jié)合特定的順式作用元件能識別和結(jié)合特定的順式作用元件并影響基因轉(zhuǎn)錄的一類蛋白質(zhì)或并影響基因轉(zhuǎn)錄的一類蛋白質(zhì)或RNARNA。順式作用元件：能影響基因表達，但不編碼能影響基因表達，但不編碼RNARNA和蛋白質(zhì)的和蛋白質(zhì)的DNADNA序列。序列。原

9、核生物基因轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控機制：1.0因子與轉(zhuǎn)錄起始的調(diào)控2.轉(zhuǎn)錄起始的負(fù)調(diào)控3.轉(zhuǎn)錄起始正調(diào)控4.復(fù)合調(diào)控真核生物轉(zhuǎn)錄水平的調(diào)控機制：1.反式作用因子的活性調(diào)節(jié)反式作用因子的活性調(diào)節(jié)2.2.反式作用因子作用方式：成反式作用因子作用方式：成環(huán)、扭曲、滑動、環(huán)、扭曲、滑動、oozingoozing3.3.反式作用因子的組合式調(diào)控反式作用因子的組合式調(diào)控轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控轉(zhuǎn)錄后水平的調(diào)控：1.5′端加帽和′端加帽和3′端多聚腺苷酸化保護′端多聚

10、腺苷酸化保護mRNA在轉(zhuǎn)錄過程中不被降在轉(zhuǎn)錄過程中不被降DNA芯片技術(shù)的主要應(yīng)用：基因組分析及發(fā)現(xiàn)新的基因芯片技術(shù)的主要應(yīng)用：基因組分析及發(fā)現(xiàn)新的基因基因表達的研究基因表達的研究DNA序列分析序列分析基因診斷和基因藥物設(shè)計因診斷和基因藥物設(shè)計Western免疫印跡：免疫印跡：Westernblot原理與核酸分子雜交相似，只是以偶聯(lián)標(biāo)記物的抗體分子原理與核酸分子雜交相似，只是以偶聯(lián)標(biāo)記物的抗體分子作為探針，檢測轉(zhuǎn)移到固相支持物上的蛋白質(zhì)分

11、子。作為探針，檢測轉(zhuǎn)移到固相支持物上的蛋白質(zhì)分子。PCR技術(shù)原理：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)技術(shù)原理：聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR):PCR是模擬天然是模擬天然DNA復(fù)制過程，利用復(fù)制過程，利用DNA聚合酶聚合酶催化一對引物間特異催化一對引物間特異DNA片段合成的體外擴增技術(shù)。片段合成的體外擴增技術(shù)。其主要熱循環(huán)過程為：變性、退其主要熱循環(huán)過程為：變性、退火、延伸三個步驟?；?、延伸三個步驟。平臺效應(yīng)（平臺效應(yīng)（plateaueffect）：）：PCR經(jīng)過

12、一定數(shù)量的循環(huán)后，經(jīng)過一定數(shù)量的循環(huán)后，DNA片段不再呈指數(shù)累積，而片段不再呈指數(shù)累積，而是進入線性增長期或靜止期，即平臺效應(yīng)。是進入線性增長期或靜止期，即平臺效應(yīng)。RTPCR(reversetranionPCR)：以mRNA為模板逆轉(zhuǎn)錄合成為模板逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA，再以此，再以此cDNA為模為模板進行板進行PCR反應(yīng)。反應(yīng)。實時熒光定量實時熒光定量RTPCRRealtimefluescentquantitative–PCR，F(xiàn)QPCR

13、：PCR擴增指數(shù)期內(nèi)擴增指數(shù)期內(nèi)極小的擴增效率改變會極大地影響產(chǎn)量。極小的擴增效率改變會極大地影響產(chǎn)量。應(yīng)用：用于基因應(yīng)用：用于基因DNA拷貝數(shù)和拷貝數(shù)和mRNA表達定量表達定量分析。分析。8:限制性核酸內(nèi)切酶（限制性核酸內(nèi)切酶（restrictionendonuclease）：能從雙鏈能從雙鏈DNA內(nèi)部特異位點識別并且內(nèi)部特異位點識別并且裂解磷酸二酯鍵解磷酸二酯鍵生成寡生成寡寡聚核苷酸寡聚核苷酸。核酸外切酶核酸外切酶(exonucle

14、ases)從多核苷酸鏈的一端開始按序催化水解磷酸二酯鍵，降解核苷酸從多核苷酸鏈的一端開始按序催化水解磷酸二酯鍵，降解核苷酸產(chǎn)生單個的核苷酸（產(chǎn)生單個的核苷酸（DNA為dNTP，RNA為NTP）。逆轉(zhuǎn)錄酶（逆轉(zhuǎn)錄酶（reversetranase）是一種）是一種RNA依賴的依賴的DNA聚合酶，即以聚合酶，即以RNA為模板合成為模板合成DNA，合成方向為合成方向為5ˊ→3ˊ，無ˊ，無3ˊ→5ˊ外切酶活性。用于以ˊ外切酶活性。用于以mRNA為模

15、板合成為模板合成cDNA，構(gòu)建構(gòu)建cDNA文庫。文庫。載體載體(vect):將外源將外源DNA片段（目的基因）轉(zhuǎn)移至片段（目的基因）轉(zhuǎn)移至受體細(xì)胞的一種能自我復(fù)制的受體細(xì)胞的一種能自我復(fù)制的DNA分子。最常用的載體是細(xì)菌質(zhì)粒、噬菌體和動植物病毒分子。最常用的載體是細(xì)菌質(zhì)粒、噬菌體和動植物病毒等。等。質(zhì)粒（質(zhì)粒（plas）：）：質(zhì)粒是存在于多數(shù)細(xì)菌和某些真核生物染色體外的雙鏈環(huán)狀的質(zhì)粒是存在于多數(shù)細(xì)菌和某些真核生物染色體外的雙鏈環(huán)狀的DN

16、A分子。子。特點：（1）分子量相對較小，能在細(xì)菌內(nèi)穩(wěn)定存在，有較高的拷貝數(shù)。）分子量相對較小，能在細(xì)菌內(nèi)穩(wěn)定存在，有較高的拷貝數(shù)。（2）具有多個限制）具有多個限制性內(nèi)切酶的單一切點，便于外源基因的插入。性內(nèi)切酶的單一切點，便于外源基因的插入。（3）具有一個以上的遺傳標(biāo)志，）具有一個以上的遺傳標(biāo)志，（4）能自）能自我復(fù)制我復(fù)制基因克隆基本過程：①制備目的基因和相關(guān)載體；基因克隆基本過程：①制備目的基因和相關(guān)載體；②將目的基因和有關(guān)載體進行

17、連接；②將目的基因和有關(guān)載體進行連接；③將重組的③將重組的DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞；分子導(dǎo)入受體細(xì)胞；④DNA重組體的篩選和鑒定；重組體的篩選和鑒定；⑤DNA重組體的擴增、表達和其他研究。重組體的擴增、表達和其他研究。真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染：將外源分子如真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染：將外源分子如DNA，RNA等導(dǎo)入真核細(xì)胞等導(dǎo)入真核細(xì)胞。研究基因功能、基因表達調(diào)研究基因功能、基因表達調(diào)控、突變分析和蛋白質(zhì)生產(chǎn)?？亍⑼蛔兎治龊偷鞍踪|(zhì)生產(chǎn)。真核細(xì)胞轉(zhuǎn)染的方法與基本原理