1、有機磷農(nóng)藥毒死蜱是一種具有顯著環(huán)境毒性的化學物質，目前在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中用量很大。玫瑰紅紅球菌（Rhodococcus thodochrous） HW-D3菌株可高效降解毒死蜱，是毒死蜱污染生物修復的優(yōu)良菌株，可用于基因工程菌構建的研究。本實驗獲得以下主要研究結果。
　　 1．采用抗生素梯度平板法，測定了HW-D3菌株對常用抗生素的抗性。Chl、Km、Tc、Str、Ery、Amp和Neo對HW-D3菌株的最低抑制濃度（MIC）分別為：

2、10μg/mL、3μg/mL、3μg/mL、0.5μg/mL、0.5μg/mL、4μg/mL、3μg/mL。HW-D3菌株在含30μg/mL Chl的LB培養(yǎng)基上可以生長但比較緩慢，對Km、Tc、Str、Ery、Amp和Neo六種常用抗生素比較敏感。幾種抗生素都可以作為HW-D3菌株遺傳轉化的篩選壓力。
　　 2．測定了HW-D3菌株的生長曲線和降解活性，0～12h為HW-D3菌株的延緩期，12～24 h為對數(shù)生長期，之后進入穩(wěn)

3、定期和衰亡期。培養(yǎng)48h時HW-D3菌株對毒死蜱的降解活性達到最高，而在細胞生長旺盛的對數(shù)期活性較低。
　　 3．HW-D3菌株有一定的自養(yǎng)能力．高濃度的毒死蜱會抑制HW-D3菌株的生長。實驗中未發(fā)現(xiàn)水解圈等適合作為遺傳轉化篩選標記的菌落特征。
　　 4．采用堿裂解法中量提取HW-D3菌株的質粒DNA。HW-D3菌株細胞中有一個分子量約15kb的質粒，拷貝數(shù)較少，不易于分子生物學操作，不適合用于構建遺傳轉化載體。為降低載

4、體構建難度，減少后續(xù)實驗工作量，本實驗以Toru Matsui等構建的Rhodococcus-E．coli穿梭質粒表達載體pNC9501為材料構建載體，并研究HW-D3菌株的遺傳轉化方法。
　　 5．采用pNC9501質粒成功轉化E．coli5α菌株，轉化率為1.01×102個轉化子/μg質粒DNA。
　　 6．采用電轉化和原生質體轉化兩種方法研究HW-D3菌株的遺傳轉化方法，但均未得到質粒pNC9501的陽性轉化子，可

5、能由于HW-D3菌株的限制性內(nèi)切酶系統(tǒng)活性較高，阻礙了外源DNA的轉入。有待進一步研究建立、完善HW-D3菌株的遺傳轉化方法。
　　 7．為研究HW-D3菌株在環(huán)境中的檢測，本實驗以E． coli WA803菌株為供體菌，以E． coli HB101菌株為輔助菌，采用三親接合的方法把帶有l(wèi)uxAB的pTR102質粒轉入受體菌HW-D3菌株中，但未取得成功。
　　 8．采用真細菌通用FISH探針EUB338與純培養(yǎng)的HW-