1、第十一章非發(fā)酵革蘭陰性桿菌一、教學(xué)大綱要求（1）非發(fā)酵菌的概念、種類(lèi)和初步鑒定特征。（2）假單胞菌屬的分類(lèi)、臨床意義、細(xì)菌特性、實(shí)驗(yàn)室檢查和耐藥性。（3）銅綠假單胞菌的臨床意義、細(xì)菌特性、實(shí)驗(yàn)室檢查和耐藥性。（4）熒光假單胞菌、惡臭假單胞菌、斯氏假單胞菌的臨床意義、細(xì)菌特性和實(shí)驗(yàn)室檢查。（5）不動(dòng)桿菌屬、寡養(yǎng)單胞菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬和軍團(tuán)菌的臨床意義、細(xì)菌特性、實(shí)驗(yàn)室檢查和耐藥性。（6）黃桿菌屬和莫拉菌屬的細(xì)菌特性和實(shí)驗(yàn)室檢查。二、教材內(nèi)容

2、精要（一）非發(fā)酵菌的主要特點(diǎn)和分類(lèi)非發(fā)酵菌（NonfermentativeBacilli）是一群不發(fā)酵葡萄糖或僅以氧化形式利用葡萄糖的需氧或兼性厭氧、無(wú)芽胞的革蘭陰性桿菌；在分類(lèi)學(xué)上分別屬于不同的科、屬和種，但生化特征十分接近，多為條件致病菌，主要引起院內(nèi)感染。非發(fā)酵菌包括的菌種較多，主要有下列菌屬：假單胞菌屬（Pseudomonas）、不動(dòng)桿菌屬（Aciobacter）、寡養(yǎng)單胞菌屬（Stenotrophomonas）、伯克菌屬（Bu

3、rkholderia）、產(chǎn)堿桿菌屬（Alcaligenes）、無(wú)色桿菌屬（Achromobacter）、莫拉菌屬（Maxella）、金氏桿菌屬（Kingella）、黃桿菌屬（Flavobacterium）、艾肯菌屬（Eikenella）、土壤桿菌屬（Agrobacterium）、黃單胞菌屬（Xanthomonas）、叢毛單胞菌屬（Comamonas）、食酸菌屬（Acidovax）等。若某種未知的革蘭陰性桿菌具有以下一種或幾種特征，則懷疑

4、其為非發(fā)酵菌：1.氧化發(fā)酵試驗(yàn)常顯示是氧化型或產(chǎn)堿型。2.氧化酶陽(yáng)性，非發(fā)酵菌中，除不動(dòng)桿菌和嗜麥芽寡養(yǎng)單胞菌外氧化酶試驗(yàn)均為陽(yáng)性。但并非所有氧化酶陽(yáng)性的革蘭陰性桿菌都是非發(fā)酵菌，如巴斯德菌、氣單胞菌、鄰單胞菌和弧菌屬等也是氧化酶陽(yáng)性但不是非發(fā)酵菌。3.動(dòng)力，非發(fā)酵菌大部分為專(zhuān)性需氧菌，在半固體培養(yǎng)基上觀察動(dòng)力不明顯，可用懸滴法或鞭毛染色法檢測(cè)其動(dòng)力。（二）假單胞菌屬假單胞菌屬（Pseudomonas）為嚴(yán)格需氧、有鞭毛、無(wú)芽胞、無(wú)莢膜

5、的革蘭陰性桿菌，氧化酶試驗(yàn)均陽(yáng)性，是假單胞菌科的代表菌屬。1分類(lèi)假單胞菌科由假單胞菌屬及其親緣關(guān)系密切的菌屬（以前大部分屬于假單胞菌屬）組成，用于假單胞菌科分類(lèi)的方案有兩個(gè)，一是根據(jù)細(xì)菌的表型特征分為7個(gè)主要的組，二是根據(jù)rRNADNA同源研究將假單胞菌科分為5個(gè)rRNA群。盡管假單胞菌科的絕大部分細(xì)菌原先都被歸類(lèi)于假單胞菌屬，但現(xiàn)在只有rRNAⅠ群的細(xì)菌屬于假單胞菌屬（Pseudomonas），包括銅綠假單胞菌、熒光假單胞菌、惡臭假單

6、胞菌、斯氏假單胞菌、曼多辛假42℃生長(zhǎng)、極端單鞭毛乙酰胺酶陽(yáng)性銅綠假單胞菌圖111非發(fā)酵菌檢驗(yàn)程序（2）標(biāo)本采集根據(jù)感染部位不同分別采集痰液、分泌物、尿液以及醫(yī)院環(huán)境用品等。（3）檢驗(yàn)方法非發(fā)酵菌鑒定較為復(fù)雜，應(yīng)先進(jìn)行初步分群（屬），然后再進(jìn)行種的鑒定。初步分群的常用實(shí)驗(yàn)為葡萄糖氧化發(fā)酵試驗(yàn)（OF試驗(yàn)）、氧化酶試驗(yàn)、動(dòng)力觀察。再進(jìn)一步作生化試驗(yàn)進(jìn)行菌種鑒定。4.耐藥性假單胞菌屬的細(xì)菌對(duì)有些抗生素天然耐藥，臨床治療假單胞菌感染的抗菌藥物主

7、要有三類(lèi)：β內(nèi)酰胺類(lèi)、氨基糖苷類(lèi)和喹諾酮類(lèi)。按美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)（NationalCommitteefClinicalLabatyStards，NCCLS）推薦，非腸桿菌科細(xì)菌除銅綠假單胞菌和不動(dòng)桿菌屬外，藥敏試驗(yàn)不選用KirbyBauer法，應(yīng)選用肉湯或瓊脂稀釋法或Etest法。（三）銅綠假單胞菌銅綠假單胞菌（P.aeruginosa）是假單胞菌屬的代表菌種，廣泛分布于自然界和人體，其在外界環(huán)境中存在的重要條件是潮濕環(huán)境；為條

8、件致病菌，主要引起醫(yī)院內(nèi)感染。1細(xì)菌特性（1）形態(tài)染色革蘭陰性桿菌，菌體呈球桿狀或長(zhǎng)絲狀，長(zhǎng)短不一；單個(gè)、呈雙或短鏈狀排列；無(wú)芽胞，有莢膜，一端有單鞭毛，運(yùn)動(dòng)活潑，臨床分離株常有菌毛。（2）培養(yǎng)特性專(zhuān)性需氧菌，部分菌株能在兼性厭氧環(huán)境中生長(zhǎng)，營(yíng)養(yǎng)要求不高，在普通培養(yǎng)基上生長(zhǎng)良好，可生長(zhǎng)溫度范圍是25℃~42℃，最適生長(zhǎng)溫度35℃，4℃不生長(zhǎng)而42℃生長(zhǎng)是該菌的鑒別點(diǎn)之一。在血平板、麥康凱平板上均可形成5種不同形態(tài)的菌落：①典型型，菌落呈

9、灰綠色，大小不一，扁平濕潤(rùn)，邊緣不規(guī)則，呈傘狀伸展，表面常可見(jiàn)金屬光澤；②大腸菌樣型，菌落圓形凸起，灰白色半透明，似大腸埃希菌菌落；③黏液型，菌落光滑凸起，呈黏液狀；④侏儒型，細(xì)小，無(wú)光澤半透明菌落；⑤粗糙型，菌落中央凸起，邊緣扁平，表面粗糙。在血平板上?？梢?jiàn)透明溶血環(huán)，有生姜?dú)馕叮辉谝后w培養(yǎng)基中呈混濁生長(zhǎng)，表面可形成菌膜，在SS瓊脂平板上，該菌經(jīng)過(guò)24h培養(yǎng)形成較小無(wú)色半透明菌落，一般不易與沙門(mén)菌和志賀菌菌落相區(qū)別，但經(jīng)48h培養(yǎng)菌落

10、中央呈棕綠色。銅綠假單胞菌在普通瓊脂平板上生長(zhǎng)時(shí)，可產(chǎn)生多種色素，主要為綠膿素（為銅綠假單胞菌特征性色素）和青膿素（熒光素），前者為藍(lán)綠色。從臨床標(biāo)本分離的銅綠假單胞菌約有80%~90%產(chǎn)生綠膿素和青膿素。（3）生化反應(yīng)氧化酶陽(yáng)性，在OF培養(yǎng)基上，能氧化利用葡萄糖、木糖產(chǎn)酸，精氨酸雙水解酶陽(yáng)性，乙酰胺酶陽(yáng)性，液化明膠，利用枸櫞酸鹽，還原硝酸鹽并產(chǎn)生氮?dú)?，吲哚陰性。?）抗原構(gòu)造銅綠假單胞菌有菌體（O）抗原、鞭毛（H）抗原、黏液（S）抗原