1、第二軍醫(yī)大學碩士學位論文PfCP-2.9重組瘧疾疫苗免疫接種與瘧疾自然感染免疫應答特性的比較研究姓名：廖源申請學位級別：碩士專業(yè)：病原生物學指導教師：潘衛(wèi)慶20090501第二軍醫(yī)大學碩士學位論文免疫應答反應的特異性及產(chǎn)生瘧疾免疫保護作用的區(qū)域，本實驗室已構(gòu)建和表達了M S P l ．1 9 和A M A l ( I I I ) 兩個重組蛋白和P 2 8 合成肽，以及M S P l ．1 9 的兩個E G F 樣結(jié)構(gòu)域即E G F l

2、和E G F 2 。為了解P f C P ．2 ．9 重組疫苗的免疫原性，以P f C P ．2 ．9 及其組分M S P l ．1 9 、A M A l ( I I I ) 為包被抗原，選取6 8 份P f C P ．2 ．9 疫苗的臨床試驗志愿者免疫血清( 其中4 8 份為免疫組，2 0 份為安慰劑組) ，利用酶聯(lián)免疫吸附測定( E n z y m e ．1 i n k e di m m u n o s o r b e n ta s

3、 s a y ，E L I S A ) 的方法檢測各組分抗原在志愿者體內(nèi)產(chǎn)生的特異性抗體的水平。結(jié)果顯示，除了2 0 名安慰劑組志愿者外，其余4 8 名志愿者均能產(chǎn)生針對P f C P - 2 ．9 、M S P l ．1 9 、A M A l ( I I I ) 的特異性抗體。比較這4 8 名免疫組志愿者免疫血清中針對各組分抗原的抗體效價發(fā)現(xiàn)，以抗P f C P ．2 ．9 抗體為最高，平均為1 3 ，9 3 1 ，最高的志愿者達1

4、0 6 以上。6 8 名志愿者分別來自三個免疫劑量組( 5 u g ，2 0 u g ，5 0 u g ) ，經(jīng)過對各組抗體效價均數(shù)的統(tǒng)計分析，5 0 u g 組明顯高于5 u g 組和2 0 u g 組，存在顯著差異( P0 ．0 5 ) 。大部分免疫組志愿者血清中針對P f C P 一2 ．9 特異性抗體水平遠高于相應的針對M S P l ．1 9 以及A M A I ( 1 H ) 的抗體效價之和，提示融合抗原較兩個組分具有更強的

5、免疫原性。通過E I I S A 實驗和統(tǒng)計分析H L A —D R B l 基因類型與P f C P ．2 ．9 抗體免疫應答水平的關聯(lián)性發(fā)現(xiàn)，H L A ．D R 6 可能抑制了P f C P ．2 ．9 免疫志愿者抗體免疫應答。為了解P f C P ．2 ．9 重組疫苗免疫志愿者血清對天然蟲體的識別能力，用本實驗室培養(yǎng)的惡性瘧原蟲海南株( F C C l ／H 【N ) 進行間接熒光抗體實驗( I F A ) ，結(jié)果發(fā)現(xiàn)重組疫苗免

6、疫志愿者血清能識別天然蟲體；通過裂解惡性瘧原蟲海南株( F C C l ／H N ) 蟲體，抽提其膜蛋白進行W e s t e r n —B l o t 試驗，結(jié)果發(fā)現(xiàn)重組疫苗免疫志愿者血清能識別M S P ．1 和A M A l 的條帶。提示P f C P ．2 ．9 重組蛋白與天然構(gòu)象十分接近。在以上實驗的基礎上，我們進一步分析了志愿者免疫血清的抗體類型，結(jié)果表明，I g G l 是免疫血清中的主要抗體類型。免疫血清中也同時能檢測到