1、四川大學(xué)碩士學(xué)位論文川澤瀉（Alisma plantago-aquatica.Linn）塊莖凝集素的分離純化和性質(zhì)研究姓名：劉超申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：生物化學(xué)與分子生物學(xué)指導(dǎo)教師：鮑錦庫(kù)20060430陰川大學(xué)碩士學(xué)位論文A P L 不同很多其他的凝集素有很強(qiáng)的耐高溫能力，而且對(duì)酸、堿也比較敏感。用N B S 修飾T r p 后，T r p 的B 一吲哚基的破壞使活性大部分喪失，表明T r p 對(duì)凝血活性是至關(guān)重要的。而且計(jì)算出每分子

2、A P L 含有2 個(gè)T r p 殘基，其中一個(gè)T r p位于凝集活性中心，另一個(gè)位于分子表面的疏水袋中，與凝集活性無(wú)關(guān)?；瘜W(xué)修飾的結(jié)果顯示，T y r 、S e r ／T h r 等與凝集活性無(wú)關(guān)，只是在維持凝集素分子的構(gòu)象上具有一定的作用。而A r g 、- S H 的化學(xué)修飾對(duì)凝集素的血細(xì)胞凝集活性的影響較大，其中A r g 的化學(xué)修飾使活性降低5 0 ％，一S H 的化學(xué)修飾使活性基本喪失，表明精氨酸和半胱氨酸對(duì)凝集素的凝集活性

3、中心的構(gòu)成起重要的作用，即這兩類(lèi)氨基酸可能直接參與了A P L 凝集活性結(jié)構(gòu)域的組成。A s p 和G l u 的化學(xué)修飾使凝集素的凝集血細(xì)胞的活性降低2 0 ％左右，表明這些氨基酸的化學(xué)修飾對(duì)凝集素的凝集活性有一定的影響，但是并不直接參與到凝集活性中心的組成，可能位于凝集活性的附近，對(duì)維持凝集活性中心的結(jié)構(gòu)域的穩(wěn)定起到輔助的作用。天然的A P L 在2 2 0 n m 到4 0 0 h m 之間有一個(gè)紫外吸收峰，最大峰值在2 7 8

4、．5 r i m左右，峰谷在2 5 6 n m 左右。凝集素A P L 天然狀態(tài)下的遠(yuǎn)紫外( 1 9 0 —2 5 0 n t o ) C D譜研究表明在1 9 5 和2 0 0 h m 處有兩負(fù)峰，峰值分別為一7 ．5 ×1 0 一d c g ．c m 2 ／d r o o l和．6 ．9 X1 0 0 d e g ．c m 2 ／d m o l 。在2 2 8 n m 有- 4 , 肩，可見(jiàn)A P L 是一個(gè)特異性高曠螺旋

5、的蛋白質(zhì)。從熒光光譜和凝血活性的研究表明，變性劑S D S 和G u —H C I 對(duì)凝集紅細(xì)胞活性的影響比較大。在濃度分別為5 m m o l ／L 和大于I m o l ／L 時(shí)，雖有部分活性，但構(gòu)象的變化很大。而交性劑U r e a 對(duì)凝集素活性中心構(gòu)象的影響較小，盡管濃度達(dá)到8 M 0 1 ／L ，仍有4 0 ％左右的凝集活性，但此時(shí)凝集素分子的整個(gè)構(gòu)象發(fā)生了較大的變化。研究不同溫度、p H 和特異化學(xué)修飾后A P L 的熒光光

6、譜變化，發(fā)現(xiàn)溫度的升高熒光強(qiáng)度逐漸降低，但是到高于8 0 ℃時(shí)，熒光強(qiáng)度急劇增強(qiáng)，同時(shí)發(fā)生紅移，表明在高溫環(huán)境中凝集素的結(jié)構(gòu)受到極大的破壞，使生色基團(tuán)的極性增強(qiáng)而處于強(qiáng)極性環(huán)境中。p H 的改變對(duì)熒光光譜影響表明在酸和堿的環(huán)境中，凝集素的構(gòu)象發(fā)生改變，但生色基團(tuán)的極性沒(méi)有變化。丙稀酰胺、K I 和氯化銫三種淬滅劑中只有丙烯酰胺才能夠很好的使A P L 的熒光淬滅，丙稀酰胺能淬滅9 8 ．5 2 ％色氨酸殘基的熒光，而C s C I 和K