1、基金項(xiàng)目： 國(guó)家藥典委員會(huì)國(guó)家藥品（ 維藥） 標(biāo)準(zhǔn)提高項(xiàng)目（ ５１０）作者簡(jiǎn)介： 劉 杰（ １９８０－） ， 男， 碩士， 主管中藥師， 研究方向： 中藥質(zhì)量控制。通信作者： 田樹(shù)革，男， 博士，教授，博士生導(dǎo)師，研究方向：中藥質(zhì)量控制及評(píng)價(jià)，Ｅ - ｍａｉｌ：ｔｓｇｙｚ＠ｓｉｎａ． ｃｏｍ。維藥苜蓿子中總多酚與總多糖的含量測(cè)定劉 杰 １ ，張鳳雪 ２ ，阿來(lái)·賽坎 ２ ，丁文歡 ３ ，田樹(shù)革 ３（ 新疆醫(yī)科大學(xué) １ 附屬中醫(yī)

2、醫(yī)院，烏魯木齊 ８３０００２；２ 中醫(yī)學(xué)院，３ 中心實(shí)驗(yàn)室，烏魯木齊 ８３００１１）摘要：目的 建立苜蓿子中總多糖與總多酚含量的測(cè)定方法。 方法 以葡萄糖、 沒(méi)食子酸為對(duì)照品， 以蒽酮 - 硫酸、 福林試劑 - 碳酸鈉溶液體系為顯色劑， 采用可見(jiàn)分光光度法在檢測(cè)波長(zhǎng) ５８２、 ７６０ ｎｍ 處測(cè)定 １０ 批苜蓿子中總多糖與總多酚的含量。結(jié)果 葡萄糖溶液濃度在 ０． ０２～０． １２ ｍｇ ／ ｍＬ、 沒(méi)食子酸溶液濃度為 １～７ μ ｇ

3、／ ｍＬ （ ｒ ＝０． ９９９ ５） 范圍內(nèi)與吸光度呈良好的線性關(guān)系， 加樣回收率為 １０４． ３０ ％、 １０１． ４６％， ＲＳＤ 為 ２． ４０ ％、 ２． ９０ ％， 總多糖的含量為 ２２． ３４～５３． ４３ ｍｇ ／ ｇ， 總多酚的含量為 ３． ０３～４． ８８ ｍｇ ／ ｇ。 結(jié)論 可見(jiàn)分光光度法簡(jiǎn)單， 準(zhǔn)確性、 重復(fù)性良好， 為苜蓿子多糖與多酚的進(jìn)一步研究奠定了基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞：苜蓿子；總多糖；總多酚中圖分類(lèi)號(hào)： Ｒ９１４

4、 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼： Ａ 文章編號(hào)： １００９ - ５５５１（ ２０１５） ０５ - ０５７１ - ０３ｄｏｉ： １０． ３９６９ ／ ｊ． ｉｓｓｎ． １００９ - ５５５１． ２０１５． ０５． ０１２Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ ａｎｄ ｔｏｔａｌ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｓａｔｉｖａ Ｌ．ＬＩＵ Ｊｉｅ １ ，ＺＨＡＮＧ Ｆｅｎｇｘｕｅ ２ ，Ａｌａｉ Ｓａｉ

5、ｋａｎ ２ ，ＤＩＮＧ Ｗｅｎｈｕａｎ ３ ，ＴＩＡＮ Ｓｈｕｇｅ ３（ １Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｔｈｅ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｔｈｅ ＴＣＭ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ａｆ ｆｉｌｉａｔｅｄ ｔｏ Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ，Ｕｒｕｍｑｉ ８３０００２， Ｃｈｉｎａ ； ２Ｃｏｌｌｅｇｅ ｏｆ ＴＣＭ ，３Ｃｅｎｔｒａｌ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｏｆ Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉ

6、ｔｙ ，Ｕｒｕｍｑｉ ８３００１１， Ｃｈｉｎａ ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｄｅｖｅｌｏｐ ａ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｃｏｎｔｅｎｔ ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ａｎｄ ｐｏｌｙｐｈｅ -ｎｏｌｓ ｉｎ Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｓａｔｉｖａ Ｌ． ｓｅｅｄｓ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｇｌｕｃｏｓｅ ａｎｄ Ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｓ ａ ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ ｓ

7、ｕｂｓｔａｎｃｅ，ｂｙａｎｔｈｒｏｎｅ ｓｕｌｆｕｒｉｃ ａｃｉｄ ａｎｄ Ｆｏｌｉｎ ｒｅａｇｅｎｔ － ｓｏｄｉｕｍ ｃａｒｂｏｎａｔｅ ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｓｙｓｔｅｍ ａｓ ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｃ ａｇｅｎｔ；ｔｈｅｖｉｓｉｂｌｅ ｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｙ ｗａｓ ｕｓｅｄ ｔｏ ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｔｏｔａｌ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ａｎｄ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ ｉｎ１０ ｂａ

8、ｔｃｈｅｓ ｏｆ Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｓａｔｉｖａ Ｌ． ｓｅｅｄｓ ｂｙ ＵＶ ａｔ ５８２ ｎｍ ａｎｄ ７６０ ｎｍ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｕ -ｃｏｓｅ ｉｎ ０． ０２－０． １２ ｍｇ ／ ｍＬ ａｎｄ ｇａｌｌｉｃ ａｃｉｄ ｉｎ ｔｈｅ ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ ｏｆ １－７ ｇ ／ ｍＬ （ ｒ ＝０． ９９９ ５）ｓｈｏｗｅｄ ａ ｇｏｏｄｌｉｎｅａｒ ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉ

9、ｐ ｂｅｔｗｅｅｎ ａｂｓｏｒｂａｎｃｅ ｒａｎｇｅ． Ｔｈｅ ａｖｅｒａｇｅ ｒｅｃｏｖｅｒｙ ｗａｓ １０４． ３０％，１０１． ４６％ ｗｉｔｈ ＲＳＤ＝３． ４０％，２． ９０％，ｔｈｅ ｃｏｎｔｅｎｔｓ ｏｆ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ ａｎｄ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ ｗｅｒｅ ２２． ３４ － ５３． ４３ ｍｇ ／ ｇ ａｎｄ ３． ０３ －４． ８８ ｍｇ ／ ｇ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｍｅｔｈｏｄ ｉｓ

10、ｓｉｍｐｌｅ，ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ ａｎｄ ａｃｃｕｒａｔｅ，ｗｈｉｃｈ ｃａｎ ｏｆｆｅｒ ａ ｂａｓｉｃ ｄａｔａ ｆｏｒ ｔｈｅｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｏｆ ｔｈｅ Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｓａｔｉｖａ Ｌ．Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｓａｔｉｖａ Ｌ． ；ｔｏｔａｌ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ；ｔｏｔａｌ ｐｏｌｙｐｈｅｎｏｌｓ苜蓿子是豆科植物紫花苜蓿 （ Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｓａｔｉｖａＬ． ） 的干燥

11、成熟的種子。其為維吾爾醫(yī)常用的藥物之一， 載于《 藥物之園》 ， 維語(yǔ)名叫比地烏拉蓋， 有潤(rùn)便、 理血、 通經(jīng)、 催乳、 強(qiáng)身、 生精的功效； 常用于大便秘結(jié)、 貧血、 水腫、 閉經(jīng)、 乳汁不通、 陽(yáng)痿、 體弱病、 關(guān)節(jié)炎、 癩皮病等的治療 ［ １］?，F(xiàn)代研究證明， 植物多糖具有多種藥理活性， 如抗炎、 抗氧化、 抗缺氧、 抗衰老、 抗腫瘤、 抗損傷、 抗應(yīng)激 作 用 以 及 降 血 糖 等 ［ ２］。第 ３８ 卷 第 ５ 期 新 疆

12、醫(yī) 科 大 學(xué) 學(xué) 報(bào) Ｖｏｌ． ３８ Ｎｏ． ５２０１５ 年 ５ 月 Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｘｉｎｊｉａｎｇ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｍａｙ． ２０１５明方法的準(zhǔn)確性較好。精密稱取第一批苜蓿子樣品各 ０． ５ ｇ， 共 ６ 份，各加入沒(méi)食子酸對(duì)照品 ４ ｍｇ， 按供試品溶液的制備方法提取苜蓿子多酚， 并按測(cè)定多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線同樣的方法操作， 結(jié)果加樣回收率為 １０１． ４６ ％， ＲＳＤ 為２． ９０ ％， 表明該方法的準(zhǔn)確

13、性較好。２． ８ 苜蓿子多糖、 多酚含量的測(cè)定 吸取 １ ｍＬ 的供試品溶液 １， 按“ ２． ４” 項(xiàng)下多糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法測(cè)定吸光度。將吸光度值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程得到樣品溶液中苜蓿子多糖的濃度， 并計(jì)算其多糖的含量， 結(jié)果總多糖的含量為 ２２． ３４～５３． ４３ ｍｇ ／ ｇ， 見(jiàn)表 １。吸取 ０． ４ ｍＬ 的供試品溶液 ２， 按“ ２． ４” 項(xiàng)下多酚標(biāo)準(zhǔn)曲線的方法測(cè)定吸光度。將吸光度值帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程得到樣品溶液中多酚的濃度，

14、并計(jì)算其總多 酚 的 含 量， 結(jié) 果 總 多 酚 的 含 量 為 ３． ０３ ～４． ８８ ｍｇ ／ ｇ， 見(jiàn)表 １。表 １ １０ 批苜蓿子中總多糖、 總多酚含量結(jié)果（ ｎ ＝３）批次 總多糖含量 ／ （ ｍｇ ／ ｇ） 總多酚含量 ／ （ ｍｇ ／ ｇ）１ ３７． ４５ ４． ０２２ ２８． ０２ ３． ５５３ ２８． ３１ ４． ３８４ ２７． ８７ ４． ８８５ ２５． ３６ ３． ８３６ ２９． ０５ ４． ５８７ ２２． ３

15、４ ３． ０３８ ４８． ０５ ４． ０９９ ５２． ４７ ３． ９５１０ ５３． ４３ ４． ０６３ 討論本實(shí)驗(yàn)采用水提醇沉法提取苜蓿子多糖， 將苜蓿子粉末用水超聲提取， 過(guò)濾、 放冷， 得提取液， 往提取液中加入乙醇使含醇量達(dá)到 ８０ ％， 苜蓿子多糖在醇溶液中溶解度降低而析出。提取液應(yīng)適當(dāng)濃縮，以減少乙醇用量， 但應(yīng)控制濃縮程度。濃縮提取液應(yīng)冷卻后再加入乙醇， 以免乙醇受熱揮發(fā)損失。加入乙醇時(shí)應(yīng)慢加快攪， 使反應(yīng)充分。多糖在與硫酸

16、 -蒽酮溶液反應(yīng)顯色時(shí)放置時(shí)間的長(zhǎng)短對(duì)其吸光度值影響較大， 故在測(cè)定過(guò)程中應(yīng)盡量保證每個(gè)樣品的反應(yīng)時(shí)間一致， 以降低誤差。植物多酚可溶于水、 甲醇、 乙醇等極性較強(qiáng)的溶劑， 大多選用 ５０％～ ７０％的乙醇提取時(shí)， 多酚的含量較高， 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)比水提與 ７０％的乙醇提取所得的多酚含量差異， 采用 ７０ ％的乙醇提取苜蓿子中的多酚， 測(cè)定苜蓿子中多酚含量時(shí)， 其穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示樣品在 ３０ ｍｉｎ 內(nèi)含量較穩(wěn)定， 而在 ６０ ｍｉｎ時(shí)

17、以及之后測(cè)定的結(jié)果顯示其多酚含量有所降低，可能與酚羥基的性質(zhì)有關(guān)， 因?yàn)榉恿u基易容易氧化，從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。本實(shí)驗(yàn)采用超聲提取法進(jìn)行苜蓿子多糖、 多酚的提取， 方法簡(jiǎn)便易行。采用可見(jiàn)分光光度法測(cè)定１０ 個(gè)不同批次苜蓿子多糖、 多酚含量， 結(jié)果表明不同批次的苜蓿子多糖、 多酚含量有所差異， 但 １０ 批苜蓿子中多糖的含量均較高， 而多酚的含量相對(duì)較低。實(shí)驗(yàn)結(jié)果為苜蓿子多糖、 多酚的進(jìn)一步開(kāi)發(fā)利用提供了基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。參考文獻(xiàn)：［ １］劉勇民．

18、維吾爾藥志． 下冊(cè)［ Ｍ］ ． 烏魯木齊： 新疆科技衛(wèi)生出版社， １９９９： ４１２．［ ２］邱隆樹(shù)，張毅． 抗艾滋病毒生物活性天然多糖類(lèi)化合物研究進(jìn)展［ Ｊ］ ． 中醫(yī)學(xué)報(bào)，２０１２， ２６（ １０） ： １２３１ - １２３４．［ ３］盧結(jié)文． 丹參多酚酸鹽治療冠心病心絞痛 ６８ 例［ Ｊ］ ． 環(huán)球中醫(yī)藥，２００９，２（ ４） ： ２７８ - ２７９．［ ４］梁新華，劉健，馬麗娜． 茶多酚對(duì)腎缺血再灌注損傷大鼠血清超氧化物歧 化

19、酶 和 丙 二 醛 的 影 響 ［ Ｊ］ ． 新 疆 醫(yī) 科 大 學(xué) 學(xué) 報(bào)，２００８，３１（ ５） ： ５７３ - ５７５．［ ５］楊國(guó)萍，顧政一，徐芳． 芩蒿滴鼻劑中一枝蒿抗炎有效成分的提取工藝研究［ Ｊ］ ． 新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)， ２０１３，３６（ １） ： ４７ - ５１．［ ６］丁文歡，李潔，王東東， 等． 唇香草多糖的提取工藝研究及其不同采收期含量 變 化 ［ Ｊ］ ． 新 疆 醫(yī) 科 大 學(xué) 學(xué) 報(bào)，２０１４， ３７（ ３）

20、 ：３０６ - ３０８．［ ７］鐘方曉，任海華，李巖， 等． 多糖含量測(cè)定方法比較［ Ｊ］ ． 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，２００７，１８（ ８） ： １９１６ - １９１７．［ ８］何永超， 劉雅敏， 朱艷慧， 等． 苯酚 - 硫酸顯色法測(cè)定炙甘草湯的總多糖含量研究［ Ｊ］ ． 中醫(yī)學(xué)報(bào)，２０１３，２８（ ４） ： ５４７ - ５４９．［ ９］劉波，盧曉麗，周曉英． 松補(bǔ)力口服液總多酚及總多糖的測(cè)定量［ Ｊ］ ． 新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，２０１４，３７（