1、藍(lán)圓鲹(Decapterus maruadsi)是我國(guó)大宗低值魚資源的重要品種之一，由于其色暗和容易氧化而被有限使用，一般用于制成肥料和動(dòng)物飼料，有些甚至直接丟棄，造成了極大的資源浪費(fèi)。本文以藍(lán)圓鲹為對(duì)象，采用生物酶解、抗氧化實(shí)驗(yàn)、螯合、凝膠色譜、反相高效液相色譜和質(zhì)譜等方法，系統(tǒng)的研究了酶解工藝的主要參數(shù)、酶解物體內(nèi)體外抗氧化活性、螯合對(duì)酶解物穩(wěn)定性的影響、抗氧化肽的分離純化和結(jié)構(gòu)表征，為開發(fā)藍(lán)圓鲹抗氧化肽功能性產(chǎn)品提供理論依據(jù)。主要

2、結(jié)果如下：
　　1.以藍(lán)圓鲹蛋白為底物，分別用中性蛋白酶、堿性蛋白酶、木瓜蛋白酶、胰蛋白酶和Alcalase在各自適宜條件下進(jìn)行酶解，比較酶解物的水解度、蛋白回收率和自由基清除率。結(jié)果表明藍(lán)圓鲹魚肉蛋白在中性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的作用下，其水解度、蛋白回收率和自由基清除率較高；在此基礎(chǔ)上用復(fù)合酶解新技術(shù)對(duì)藍(lán)圓鲹魚肉進(jìn)行水解研究。以水解度、蛋白回收率、自由基清除率為指標(biāo)，最終確定復(fù)合酶解藍(lán)圓鲹魚肉蛋白制備多肽的最佳工藝條件為

3、：在水料比1:2、pH為7.5、溫度50℃、酶總量為0.3％且酶配比為1:1條件下，酶解方式為中性蛋白酶和胰蛋白酶同時(shí)加入，酶解時(shí)間為5h；該條件下制備的魚肉蛋白酶解產(chǎn)物水解度和蛋白質(zhì)回收率分別為25.86%、75.24%，還原力為0.452，DPPH·和OH·半清除率分別為6.38mg/mL和14.45mg/mL。
　　2.以藍(lán)圓鲹酶解物和金屬離子為原料合成金屬螯合物，采用火焰原子吸收分光光度法，對(duì)螯合條件（質(zhì)量比，反應(yīng)溫度，反

4、應(yīng)時(shí)間及 pH）進(jìn)行了研究。確定最佳螯合條件為：以抗氧化肽:鹽質(zhì)量比15:1，pH為7在40℃下反應(yīng)40min；該條件下得出的螯合物具有較高的螯合率。且酶解物與三種金屬離子螯合產(chǎn)物中，鈣離子螯合物抗氧化效果最好。選擇抗氧化性較好的鈣離子螯合物做穩(wěn)定性分析，比較不同儲(chǔ)藏方式、熱處理、pH及模擬消化道環(huán)境對(duì)螯合物和酶解物的抗氧化穩(wěn)定性的影響，該條件下制備的金屬螯合抗氧化肽具有較弱的耐熱性和較強(qiáng)的耐酸耐堿性，低溫條件下儲(chǔ)藏有利于保持其抗氧化活

5、性。
　　3.探究了不同分子量的藍(lán)圓鲹蛋白酶解物的抗氧化活性，酶解物用三種不同的超濾膜（MW50，10 and5 kDa）分成四個(gè)組分(RSPH-I，RSH-II，RSPH-III，RSPH-IV)。各組分顯示出不同的抗氧化活性，其中小于5 kDa(RSPH-IV)組分抗氧化活性最強(qiáng)。采用Sephadex G-25凝膠色譜法將RSPH-IV分成四個(gè)組分（A,B,C,D），并分別檢測(cè)各組分的還原力和自由基清除率，最后篩出B為抗氧化能

6、力最高的部分，其余三組分的抗氧化能力依次為 C＞D＞A.并對(duì)組分 B進(jìn)行分子量分布分析，發(fā)現(xiàn)該肽段的相對(duì)分子量主要集中在335到1062 kDa.隨后采用制備柱RP-HPLC將B分成6個(gè)組分(B1，B2，B3，B4，B5，B6)，以自由基捕獲率為指標(biāo)篩選出具有較強(qiáng)抗氧化活性的組分 B3，經(jīng) RP-HPLC純度鑒定為單一峰；通過(guò)Orbitrap-LC-MS二級(jí)質(zhì)譜，鑒定出組分B2的相對(duì)分子量對(duì)506 Da，氨基酸序列為KGFR(Lys-G