1、目的：研究柴胡皂苷（ saikosaponins， SS）-b對肝細胞癌（ hepatocellular carcinoma，HCC）的治療作用，并探討其對腫瘤血管生成的影響及相關(guān)分子機制。
　　方法：⑴取50只雄性BALB/c小鼠，建立肝癌 H22移植瘤模型，隨機分為對照組（Control，NS）、SS-b低、中、高劑量組（5、10、20 mg·kg-1·d-1）、阿霉素（Doxorubicin，DOX，2 mg·kg-1，隔日

2、給藥）組。各組小鼠采用腹腔注射給藥，連續(xù)給藥10 d。剝離瘤體，稱重，計算抑瘤率；白細胞數(shù)計數(shù)，胸腺及脾臟指數(shù)；HE染色觀察腫瘤組織的形態(tài)學(xué)改變；免疫組織化學(xué)法檢測 CD34的表達情況以反應(yīng)腫瘤組織的微血管密度；Western Blot檢測腫瘤組織中血管內(nèi)皮生長因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）、基質(zhì)金屬蛋白酶-2（matrix metalloproteinase-2, MMP-2）

3、、基質(zhì)金屬蛋白酶-9（ MMP-9）、缺氧誘導(dǎo)因子（Hypoxia-inducible factor1α, HIF-1α）蛋白的表達變化及細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶（extracellular regulated protein kinases, ERK）的磷酸化表達變化。⑵采用MTT法觀察不同濃度的SS-b對人肝癌細胞株 HepG-2細胞增殖的影響；利用劃痕實驗和Transwell小室模型觀察SS-b對HepG-2細胞遷移和侵襲能力的影響；采

4、用 Western Blot檢測 HepG-2細胞中 VEGF、MMP-2、MMP-9、HIF-1α和ERK的磷酸化表達水平。⑶建立雞胚尿囊膜模型（CAM），光鏡下觀察 SS-b低、中、高各劑量組對CAM血管生成的影響，在 BI-2000圖像分析系統(tǒng)下對血管分叉數(shù)、血管內(nèi)徑的進行觀察計數(shù)，并分析結(jié)果。⑷采用MTT法觀察 SS-b對人臍靜脈內(nèi)皮細胞（HUVEC）增殖的影響；通過劃痕實驗研究SS-b對HUVEC細胞遷移及伸展能力的影響。

5、r>　　結(jié)果：①SS-b具有明顯的抑瘤作用，SS-b低、中、高劑量（5、10、20 mg·kg-1·d-1）和 DOX（2 mg·kg-1，隔日給藥）的抑瘤率分別為24.8％、31.2%、48.6%、和59.6%，其抑瘤作用具有一定的劑量依賴性。②HE染色結(jié)果顯示對照組小鼠腫瘤細胞生長旺盛，呈多極核分裂和有絲分裂。SS-b和DOX不同劑量組小鼠腫瘤組織可見較大的壞死面積和較多的空泡區(qū)域，壞死區(qū)呈粉紅色染色，細胞核溶解。③CD34的免疫組

6、化結(jié)果顯示對照組腫瘤組織微血管豐富，SS-b低、中、高劑量組和DOX可以顯著降低腫瘤組織的微血管數(shù)目。④與對照組比較， SS-b低、中、高劑量組和 DOX組小鼠腫瘤組織中VEGF、MMP-2、HIF-1α的表達和ERK的磷酸化程度顯著降低。⑤MTT結(jié)果顯示不同濃度的SS-b對人肝癌細胞株HepG-2細胞增殖有明顯的抑制作用。經(jīng)不同濃度SS-b作用后，HepG-2細胞增殖抑制率分別為17.7%、36.7%、44.7%、58.3%、75.1

7、%、97.3%，具有一定的劑量依賴性。⑥劃痕實驗和 Transwell實驗結(jié)果顯示，與對照組相比，低、中、高劑量的SS-b對 HepG-2細胞的侵襲和遷移具有不同程度的抑制作用；SS-b低、中、高劑量和DOX可以顯著降低 HepG-2細胞 VEGF、MMP-2、MMP-9、HIF-1α的表達和ERK的磷酸化程度。⑦與對照組相比，b-FGF誘導(dǎo)的CAM血管分支數(shù)及血管內(nèi)徑均有明顯增加；與 b-FGF組相比，SS-b低、中、高各組均能抑制b

8、-FGF誘導(dǎo)的CAM血管生成，其抑制率分別為：48.1%、57.8%、63.0%。⑧MTT結(jié)果顯示，當藥物SS-b濃度為0.1 mg/mL時HUVEC細胞的增殖抑制率為12%，與對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義；劃痕實驗表明，SS-b對HUVEC的遷移能力有一定的抑制作用，表現(xiàn)為劃痕直徑明顯寬于對照組。
　　結(jié)論：SS-b可以抑制肝癌細胞的增殖、遷移及侵襲和腫瘤血管生成，該作用與其下調(diào)VEGF、MMP-2、MMP-9及HIF-1α有關(guān)。