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![檢測丙二醛的熒光探針的構(gòu)建及應(yīng)用研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/6/23/00dd9efe-44b5-4c17-8ec1-20604bf0f4e4/00dd9efe-44b5-4c17-8ec1-20604bf0f4e41.gif)
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文檔簡介
1、丙二醛,是脂質(zhì)過氧化的標(biāo)志性產(chǎn)物之一,在生物體內(nèi)的含量可以直接反映生物體被氧化的程度或損傷的程度,很多疾病的檢測都將其含量作為判斷的標(biāo)準(zhǔn)之一。到目前,已有很多的檢測方法應(yīng)用在丙二醛的檢測中,但這些檢測方法大多由于檢測條件苛刻而僅能應(yīng)用在體外樣品中的丙二醛檢測,在檢測過程中還需要依賴于高效的分離手段,才能獲得良好的檢測效果。而利用小分子熒探針對丙二醛進(jìn)行檢測則可以很好的避免上述問題,并且分子熒光探針與熒光成像技術(shù)的連用可以直接監(jiān)測細(xì)胞及活
2、體內(nèi)的丙二醛。但選擇性檢測丙二醛的熒光探針的發(fā)展情況并不理想。因此設(shè)計(jì)合成針對檢測丙二醛的熒光探針是非常有必要的。
丙二醛分子有兩個(gè)醛基,可以與肼中的兩個(gè)氨基依次發(fā)生反應(yīng),生成五元環(huán)狀的吡唑類化合物。我們利用肼與丙二醛的反應(yīng)的特異性,產(chǎn)物結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性,設(shè)計(jì)合成了兩種高選擇性檢測丙二醛的熒光探針。本論文分為三章,主要內(nèi)容如下:
第一章 緒論。主要介紹檢測醛類化合物的熒光衍生化試劑,以及熒光探針的發(fā)展。在此基礎(chǔ)上提出的本
3、論文的思路。
第二章 本章中,我們構(gòu)建了一種羅丹明酰肼類熒光探針RB4-1,有機(jī)的將苯酰肼與丙二醛的專一反應(yīng)和羅丹明螺酰胺類化合物的螺環(huán)開環(huán)反應(yīng)結(jié)合起來,實(shí)現(xiàn)了對細(xì)胞內(nèi)丙二醛的專一檢測。探針RB4-1利用苯酰肼作為識別基團(tuán),在弱酸性環(huán)境下與丙二醛反應(yīng)生成羅丹明-吡唑類化合物,探針分子內(nèi)的螺環(huán)結(jié)構(gòu)被打破,羅丹明的大共軛π鍵體系恢復(fù),紫外吸收在575 nm處與熒光強(qiáng)度在600 nm處均顯著增強(qiáng)。探針RB4-1在檢測丙二醛的實(shí)驗(yàn)條件
4、下,對常見的金屬離子、其他小分子醛類以及生物體內(nèi)的常見的物質(zhì)均無響應(yīng),對丙二醛的選擇性非常好。應(yīng)用該探針分子,我們成功實(shí)現(xiàn)了對細(xì)胞內(nèi)丙二醛的檢測,測試條件改變后還可以應(yīng)用于體外樣品中丙二醛的檢測,表明該探針分子可以應(yīng)用于不同生物體系中丙二醛的檢測,具有良好的應(yīng)用前景。
第三章 本章中,我們以4-肼-7-硝基-苯并呋咱(NBDH)作為熒光探針實(shí)現(xiàn)了對丙二醛高靈敏高選擇性的檢測。探針NBDH以苯肼作為識別基團(tuán),與丙二醛反應(yīng)后生成化
5、合物NBD-P1,NBD-P1的最大吸收波長在474 nm處,相比NBDH紅移100 nm,摩爾吸光系數(shù)為3.09×104 L·mol-1·cm-1,在水中的熒光量子產(chǎn)率高達(dá)0.105,本次實(shí)驗(yàn)利用NBD-P1這些優(yōu)異的光物理性質(zhì)以及苯肼與丙二醛反應(yīng)的特異性,通過選擇合適的測試條件,僅利用熒光分析法實(shí)現(xiàn)了對丙二醛的檢測,檢出限為7.2 nM。我們已經(jīng)成功的將NBDH應(yīng)用于胎牛血清環(huán)境中的丙二醛檢測,檢測的準(zhǔn)確度可達(dá)到98%,表明NBDH
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