超聲輔助酶解高溫豆粕制糖肽技術(shù)研究與構(gòu)效分析.pdf_第1頁(yè)
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1、高溫豆粕作為大豆提油后的副產(chǎn)物,其蛋白質(zhì)含量高達(dá)40~45%,是一種高性?xún)r(jià)比的大宗植物蛋白資源,然而高溫豆粕在生產(chǎn)過(guò)程中由于經(jīng)過(guò)高溫長(zhǎng)時(shí)處理,豆粕中的蛋白質(zhì)發(fā)生高度變性,其溶解度僅是12~15%,蛋白質(zhì)提取率較低,導(dǎo)致應(yīng)用范圍較窄,加工工序復(fù)雜,成本高,嚴(yán)重降低了高溫豆粕深加工產(chǎn)品的開(kāi)發(fā)及其使用價(jià)值,限制其在食品加工領(lǐng)域的應(yīng)用。本文采用超聲波復(fù)合酶制劑處理高溫豆粕,依次利用乙醇沉淀、DEAE-Cellulose52離子交換層析、Seph

2、adxeG-25凝膠色譜層析分離純化,制備高溫豆粕水溶性糖肽,探究高溫豆粕糖肽理化特性和構(gòu)效分析,拓展了高溫豆粕資源的利用價(jià)值,增強(qiáng)高溫豆粕的高附加值,豐富活性糖肽的種類(lèi)和功能,富有理論和現(xiàn)實(shí)意義。
  本研究主要內(nèi)容包括:⑴超聲波同步纖維素酶酶解,在超聲功率300 W,超聲時(shí)間20 min,底物濃度8.36%、纖維素酶添加量646 U/g、酶解pH值為4.1時(shí),可溶性多肽含量為18.51±0.36%,可溶性多糖含量為10.83±

3、0.32%。⑵蛋白酶添加量61200 U、酶解pH9、酶解時(shí)間3h、酶解溫度56.4℃,可溶性多肽含量為25.47±0.81%,可溶性多糖含量為13.22±0.49%。⑶采用無(wú)水乙醇(加入量為75% V/V)沉淀粗品糖肽,透析、濃縮,利用DEAE-Cellulose52離子交換層析分離、純化三種成分:糖肽a1、糖肽a2、糖肽a3,并對(duì)三種成分進(jìn)行抗氧化活性檢測(cè),選擇具有抗氧化能力較強(qiáng)的糖肽a2進(jìn)一步分離純化;采用Sephadex G-2

4、5凝膠色譜層析分離、純化后獲得篩選具有糖肽a2b1、糖肽a2b2進(jìn)行抗氧化活性檢測(cè),糖肽a2b1為本研究所提取的具有抗氧化功能的水溶性高溫豆粕糖肽。⑷高溫豆粕糖肽的蛋白含量為61.28±0.83%,糖含量為29.76±0.26%; SDS-PAGE電泳試驗(yàn)表明高溫豆粕糖肽為單一條帶,分子量為4383 D。高溫豆粕糖肽溶解性較高,NSI值高于80%; DSC測(cè)定分析,高溫豆粕糖肽的熱變性溫度為109.9℃,變性熱焓值為150.2 J/g;

5、高溫豆粕糖肽的FRAP和抑制O2-能力顯著高于高溫豆粕和高溫豆粕大豆肽。⑸高溫豆粕糖肽含量最多三種氨基酸:谷氨酸、天門(mén)冬氨酸、賴(lài)氨酸;β-消除反應(yīng),表明高溫豆粕糖肽存在O-糖肽鍵;紅外光譜分析,表明糖肽的糖環(huán)為吡喃環(huán)、糖苷鍵為α-型糖苷鍵結(jié)構(gòu);圓二色譜分析,糖肽的α-螺旋4.7%、β-折疊25.6%、β-轉(zhuǎn)角19.2%、無(wú)規(guī)則卷曲51.5%,高溫豆粕糖肽與天然蛋白質(zhì)二級(jí)結(jié)構(gòu)存在差別。⑹利用超聲波復(fù)合酶制劑處理高溫豆粕,分離純化制備一種高

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