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文檔簡介
1、自由流電泳發(fā)展到現(xiàn)在幾十年間一直存在著兩個重要的問題:分離模式的缺乏以及分離效率較低。在本實驗課題中,我們首次提出了一種新型的自由流電泳模式——“親和自由流電泳”。這個模式的提出不但豐富了自由流的傳統(tǒng)模式而且還間接的提高了自由流電泳的分離效率。在親和自由流電泳這個模式中,有較高電荷密度的鎳離子作為模型配體,組氨酸作為目標物。通過實驗條件的控制,鎳離子可以與組氨酸結(jié)合,結(jié)合形成的組氨酸-鎳離子復合物與低電荷密度的游離組氨酸分子相比,有很高
2、的電荷密度。與此同時,配體與其它組氨酸卻只有很微弱的相互作用。因此,跟其它組氨酸相比,以組氨酸-鎳離子復合物形式存在的組氨酸的遷移率大大的提高了,從而實現(xiàn)了對組氨酸的選擇性的分離和純化。基于這個模式,我們設計了親和自由流電泳的操作程序并實施了相關實驗。
實驗共分為兩部分,第一部分首先是區(qū)帶毛細管電泳的軟件模擬的設計,用于預測20種氨基酸在不同條件下的分離狀況,以確定有價值的目標待分離物,這一簡單、實用、快速的現(xiàn)代方法的引進是本
3、文的一大亮點。其次是在毛細管中對分離條件形成選擇和優(yōu)化,推導出親和自由流電泳的分離體系。
第二部分是親和自由流電泳模式可行性的驗證。在這部分中,先后進行了兩種不同的自由流電泳模式,毛細管檢測,氨基酸分析等。最后,通過對普通的自由流區(qū)帶電泳和親和自由流電泳的分離效率的比較,分析得出親和自由流電泳的優(yōu)勢和應用潛力。
這些實驗表明:(1)該技術可以大大的提高目標物組氨酸和其它氨基酸之間的分離度;(2)該技術可以選擇性的將組
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