1、自由流電泳是一種基于連續(xù)化電泳技術(shù)發(fā)張的在兩個平行板直接利用連續(xù)的液相環(huán)境分離生物樣品的技術(shù)。在垂直于背景緩沖的電場作用下，物質(zhì)根據(jù)電泳淌度不同得到分離。四種不同的自由流技術(shù)在此基礎(chǔ)上發(fā)展出來。其中包括自由流區(qū)帶電泳、自由流等速電泳、自由流等電聚焦電泳和自由流場梯度電泳。由于商業(yè)自由流設(shè)備相對大的尺寸，至今很少有商業(yè)化設(shè)備用于生物樣品的微制備。在四種自由流的分離模式中（FFZE、FFIEF、FFFSE、FFITP)，自由流區(qū)帶電泳是在商

2、業(yè)化大型自由流設(shè)備中一種用于酶分離最常用的分離模式。有文獻報道了其細節(jié)但是這些報道都是用于大量的商業(yè)制備而不是對酶在微型自由流設(shè)備下的微量制備。
　　芯片電泳在近20年內(nèi)在分離科學領(lǐng)域得到了很高的重視。然而由于其相對薄弱的制備能力和易于被蛋白沉淀堵塞，很少有報告報道其在生物樣品的微制備。對于在芯片電泳中，微量制備酶就更少了。
　　為了滿足實驗室對生物樣品的微量制備的急切需求，我們研制了一種微型的電泳。其尺寸為45 mm×30

3、 mm×100-500μm比芯片電泳(20-40 mm×20-56 mm×20-60μm)要大但比商業(yè)化的制備電泳要小的多。在這個自由流設(shè)備中，重力和一個16通道的蠕動泵成功的在分離室里形成了個穩(wěn)定的層流，并且完成了16管樣品的引流。一個常用于醫(yī)學的簡易上樣閥被很好的利用在控制帶寬上。在這個微型自由流中，重力選用的模式是和過去本實驗室研制的大型自由流有明顯不同。這種微型自由流被用于從豬的粗胰酶中微量制備極易失活的胰蛋白酶。分離效果取決于

4、緩沖液的pH和電導，樣品在分離室的保留時間，流速和所加電壓。在初步優(yōu)化下得到，純化因子為11.68，酶比活達到了商業(yè)級別(6236BAEE U/mg)，產(chǎn)率是58％，同時其分離大約20μL樣品的保留時間僅為48秒而且在其產(chǎn)量達到每小時3.34mg都表明其快速的微量制備能力。據(jù)我們所致，這是第一臺用于微量酶制備的微型自由流設(shè)備。其在分離過程中表現(xiàn)出以下優(yōu)勢：
　?。?）在這個微型自由流分離室里，沒有出現(xiàn)很強電動力干擾同時也沒有出現(xiàn)由