1、間充質(zhì)干細胞(mesenchymal stem cells，MSCs)是干細胞的一種，具有很強的自我更新和多向分化潛能。MSCs存在于動物胎兒和成體多種組織中，現(xiàn)有研究已經(jīng)從多個物種的多種組織中提取分離出間充質(zhì)干細胞，而目前研究最多的MSCs主要是骨髓源MSCs，對胎肺來源干細胞的研究還很少有報道。胎肺間充質(zhì)干細胞相對于骨髓源MSCs來說有取材方便、細胞數(shù)量多、容易分離得到及體外能夠大量擴增等優(yōu)勢，因此建立哺乳動物胎肺來源干細胞分離培養(yǎng)

2、和鑒定的方法可以豐富干細胞來源、對研究細胞發(fā)育分化、建立疾病模型均有促進作用。
　　本研究以阿爾卑斯絨山羊胎兒肺部組織為材料來源，首先分離得到可以在體外長期傳代培養(yǎng)的間充質(zhì)干細胞，之后對得到的細胞進行了形態(tài)學、生長性能、標志基因等方面鑒定，最后對間充質(zhì)干細胞進行成脂、成骨、成軟骨、成胰島、成神經(jīng)細胞等多胚層組織的誘導分化，驗證其多能性。
　　本研究主要是采用兩步酶消化法和差速貼壁法分離阿爾卑斯絨山羊胎兒肺部組織，通過形態(tài)學觀

3、察，發(fā)現(xiàn)所分離出的山羊胎肺細胞形態(tài)均一，呈現(xiàn)成纖維樣細胞形態(tài)，增殖能力旺盛，在體外傳代培養(yǎng)，發(fā)現(xiàn)傳至20代以上細胞仍然保持良好的生物學性狀。進一步通過核型分析、生長曲線測定、免疫細胞化學、RT-PCR技術鑒定其MSCs特性。其結果顯示，所分離的山羊胎肺細胞具有正常二倍體核型(2n=60);在體外生長正常，具有穩(wěn)定生物學性狀;RT-PCR顯示間充質(zhì)干細胞標志性基因CD44表達呈陽性;免疫細胞化學檢測細胞表面標記CD13、CD29、CD44

4、、CD90、CD106基因的表達與陰性對照組相比都呈陽性，造血干細胞標志基因CD45呈陰性。表明本研究分離得到的細胞具備山羊間充質(zhì)干細胞的生物學特性。
　　在確定了適合于山羊胎肺間充質(zhì)干細胞(LMSCs)培養(yǎng)和鑒定方法的基礎上，本研究進一步對所分離的山羊胎肺間充質(zhì)干細胞進行成脂、成骨、成軟骨、成胰島、成神經(jīng)細胞誘導分化實驗，觀察其向三胚層分化的多潛能情況。經(jīng)過細胞染色、免疫細胞化學及RT-PCR技術進行鑒定，結果顯示:成脂誘導后，

5、細胞經(jīng)油紅-O染色可見明顯脂滴，RT-PCR顯示成脂細胞特異性基因PPARγ2表達呈陽性;成骨誘導經(jīng)AgNO3染色后有明顯鈣化物質(zhì)，RT-PCR顯示成骨細胞特異性基因collagenⅠ表達呈陽性;成軟骨誘導經(jīng)阿利新藍染色后呈藍色，RT-PCR顯示成軟骨特異基因COL2A1表達呈陽性;成胰島β細胞誘導后經(jīng)雙硫腙染色發(fā)現(xiàn)，有細胞團出現(xiàn)，并且呈猩紅色，RT-PCR顯示胰島β細胞標記基因PDX1表達呈陽性;成神經(jīng)細胞誘導后，經(jīng)免疫細胞化學檢測，