1、目的 心肌細胞丟失、瘢痕形成及心室重構(gòu)是造成心臟功能惡化的主要因素，也是最終導(dǎo)致慢性充血性心力衰竭的主要病理基礎(chǔ)。細胞移植治療是治療心臟疾病的一種新策略。骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)目前被認為是細胞移植治療最理想的種子細胞。研究BMSCs體外定向分化為心肌樣細胞對細胞移植治療心臟疾病具有重要的理論和臨床意義，本課題旨在通過生物誘導(dǎo)及5-氮胞苷(5-aza)化學(xué)誘導(dǎo)等方法體外誘導(dǎo)BMSCs定向分化，檢測BMSCs是否可分化為心肌樣細胞

2、，觀察5-aza對BMSCs生長增殖的影響，并在體外建立各種模擬心肌內(nèi)微環(huán)境模型，對BMSCs分化的各種可能機制作一探討。 方法 體外分離、培養(yǎng)BMSCs和胚胎心肌細胞，取第4代BMSCs進行誘導(dǎo)實驗，分為生物誘導(dǎo)組和化學(xué)誘導(dǎo)組。生物誘導(dǎo)組分別采用胚胎心肌細胞與BMSCs直接混合培養(yǎng)、胚胎心肌細胞與BMSCs 間接混合培養(yǎng)及胚胎心肌細胞勻漿液誘導(dǎo)培養(yǎng)BMSCs，6天后進行免疫細胞熒光染色檢測，觀察BMSCs是否分化為

3、心肌樣細胞?；瘜W(xué)誘導(dǎo)組采用5-aza進行誘導(dǎo)處理，分別取濃度為5、10、15μmol/L的5-aza對BMSCs進行誘導(dǎo)處理，處理時間又分別分為12小時、24小時、48小時三個時間段，然后繼續(xù)用BMSCs培養(yǎng)液培養(yǎng)28天后免疫細胞熒光染色鑒定。同時，本實驗還觀察了5-aza對第4代BMSCs生長增殖的影響，取生長良好的第4代BMSCs經(jīng)5-aza處理24小時后繼續(xù)培養(yǎng)，然后間隔24小時作一次細胞計數(shù)，繪制細胞生長曲線，并與對照組進行比較

4、分析。數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計采用SPSSl2.0 for windows統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學(xué)處理，所有數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標準差((-x)±s)表示，組間比較用t檢驗，p<0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)果 1．BMSCs呈梭形成纖維樣細胞形態(tài)，貼壁集落樣生長，但傳至10代以后，細胞逐漸失去增殖能力，生長逐漸停止。2．體外能成功分離、培養(yǎng)胚胎心肌細胞，免疫細胞熒光染色鑒定心肌細胞肌節(jié)肌動蛋白陽性，并可見到胞漿中的肌纖維結(jié)構(gòu)，但并未見心肌細胞搏動。

5、3．BMSCs只有在其與胚胎心肌細胞直接混合培養(yǎng)時，才能分化為心肌樣細胞，而在其它的生物誘導(dǎo)模式下卻未見其分化為心肌樣細胞。4．經(jīng)5-aza誘導(dǎo)處理后，未見BMSCs分化為心肌樣細胞。5．5-aza能抑制BMSCs的生長增殖，尤其在細胞的對數(shù)生長期最為明顯。 結(jié)論 BMSCs經(jīng)誘導(dǎo)處理后能夠在體外分化為心肌樣細胞，尤其是模擬心肌內(nèi)微環(huán)境誘導(dǎo)是一種可行的生物誘導(dǎo)方法。在心肌微環(huán)境眾多因素中，機械因素是促進BMSCs定向分化為心肌