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文檔簡介
1、目的:
采用心肌細胞培養(yǎng)上清液、心肌組織裂解液誘導MSCs向心肌樣細胞分化、形成心肌組織樣結構。
方法:
優(yōu)化間充質干細胞體外培養(yǎng)體系,采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)MSCs,建立間充質干細胞系;采用差速貼壁法純化培養(yǎng)心肌細胞,為實驗提供參照。選取生長良好的第3代MSCs分為三組:Ⅰ組空白對照組,用含10%FBS的H-DMEM培養(yǎng)MSCs;Ⅱ組實驗對照組(5-aza誘導組),用不同濃度5-aza作用于MSCs24
2、小時后換用含有10%FBS的H-DMEM培養(yǎng);Ⅲ組心肌細胞培養(yǎng)上清液組,收集心肌細胞培養(yǎng)上清液制備條件培養(yǎng)液誘導培養(yǎng)MSCs。Ⅳ組心肌組織裂解液組,用心肌組織裂解液配置條件培養(yǎng)液誘導培養(yǎng)MSCs。各組同時培養(yǎng)4W,在倒置相差顯微鏡下觀察各組細胞形態(tài)學變化,HE染色、電子顯微鏡下觀察心肌樣細胞的結構。行α-Actin,connexin43免疫細胞化學染色、Vimentin,Ⅷ因子相關抗原免疫組織化學染色,鑒定心肌樣組織內各種細胞及其相關結
3、構。
結果:
在連續(xù)誘導培養(yǎng)4周內,心肌細胞培養(yǎng)的上清液不足以誘導骨髓MSCs分化為心肌樣細胞;5-aza、心肌組織裂解液能夠誘導骨髓MSCs分化為心肌樣細胞,且具有自律性搏動,搏動頻率約90-110次/分;HE染色可見由波形蛋白免疫組織化學染色陽性的成纖維樣細胞包裹的肌束樣結構;心肌組織裂解液誘導組可見大量中空性結構,管壁波形蛋白免疫組織化學染色陽性,Ⅷ因子相關抗原免疫組織化學染色陰性。
結論:
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