1、Annexins，即膜聯(lián)蛋白，是一類鈣離子及磷脂結(jié)合蛋白。動物細胞中膜聯(lián)蛋白參與囊泡運輸、胞吐、鈣離子通道形成、信號轉(zhuǎn)導、細胞分化等。在植物細胞中膜聯(lián)蛋白可以參與植物細胞的分泌、胞吐、鈣離子代謝、離子通道建立等一系列膜性活動。植物膜聯(lián)蛋白還能夠調(diào)節(jié)一些較為復雜的生理過程如植物抗寒、耐鹽、抗旱等，在植物緩解活性氧傷害和調(diào)節(jié)細胞液中自由鈣離子的含量方面也扮演重要角色。
　　本實驗室在篩選廣譜抗病基因RPW8.1增強子突變體的過程中，發(fā)

2、現(xiàn)一個擬南芥膜聯(lián)蛋白基因?qū)PW8.1的功能具有負調(diào)控作用，而擬南芥膜聯(lián)蛋白家族有8基因，即NN1、ANN、ANN、ANN、ANN、NN6、ANN7、ANN8。目前對ANN1和ANN4的功能比較明確，而對該家族其他成員的生物學功能還不清楚，也沒有關(guān)于擬南芥膜聯(lián)蛋白亞細胞定位的相關(guān)報道。因此，本論文采用融合熒光蛋白定位技術(shù)和本生煙瞬時表達系統(tǒng)，對擬南芥八個膜聯(lián)蛋白開展了亞細胞定位研究，同時也完成了水稻的兩個膜聯(lián)蛋白OsANN和OsANNP

3、35的定位。我們還通過轉(zhuǎn)基因技術(shù)進一步研究了擬南芥ANN1、ANN4、ANN6、ANN8和水稻OsANN在擬南芥中的亞細胞定位。綜合亞細胞定位實驗結(jié)果，我們發(fā)現(xiàn)擬南芥大多數(shù)膜聯(lián)蛋白(ANN1、ANN2、ANN3、ANN7、ANN8)是定位于細胞質(zhì)呈現(xiàn)完整的細胞輪廓，特別像是綁定在細胞膜上，而且它們還圍繞著細胞核形成ER（Endoplasmic reticulum，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)）環(huán)，ANN5-eYFP在細胞質(zhì)和細胞核都有定位，ANN4-eYFP

4、和ANN6-eYFP表現(xiàn)為獨特定位方式(ANN4-eYFP絲條狀局部聚集，ANN6-eYFP局部點狀沉積)?？梢?，擬南芥膜聯(lián)蛋白亞細胞定位具有多樣性，這與它們功能的多樣性是相輔相成的。
　　實驗過程中，我們加入了核定為信號以輔助觀察。有趣的是，我們發(fā)現(xiàn)ANN4和ANN6在本生煙中會延緩核定位信號的定位。我們又對ANN4和ANN6進行了過表達研究，同時比較了ANN4和ANN6過表達前后的亞細胞定位情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)過表達ANN4-eYF

5、P和ANN6-eYFP后其細胞定位結(jié)果有所差異，表現(xiàn)為很明顯的ANN4-eYFP絲條狀局部聚集和ANN6-eYFP的點狀沉積。我們對擬南芥35S∷ANN4-eYFP和35S∷ANN6-e YFP做了抗病性鑒定，結(jié)果顯示接種白粉菌后35S∷ANN6-e YFP葉片上孢子萌發(fā)率和菌絲長度顯著高于野生型，說明過表達ANN6-eYFP增加了擬南芥對白粉菌的易感性。
　　通過本論文的研究，我們發(fā)現(xiàn)擬南芥膜聯(lián)蛋白家族成員具有豐富的亞細胞定位類