1、背景：
　　肝纖維化嚴重影響人體的健康，其中肝星狀細胞（HSCs）的活化扮演著至關重要的角色?；罨母涡菭罴毎置谀z原等成分，引起細胞外基質(zhì)的沉積，進而引起肝纖維化。目前治療肝纖維化主要集中在抑制HSCs增殖并阻止它的活化，減少細胞外基質(zhì)的積聚。近年來，國內(nèi)外研究認為低氧在肝纖維化中起到關鍵作用。當細胞暴露于低氧時可誘導低氧誘導因子（HIF-1α）的產(chǎn)生。Rho相關含卷曲螺旋蛋白激酶1（ROCK1）與 HIF-1α之間的關系密切，

2、多種疾病中兩者存在緊密聯(lián)系。
　　目的：
　　旨在分析 HSCs于低氧下增殖和膠原合成過程中，是否存在 HIF-1α和ROCK1的聯(lián)系，進一步加深對肝纖維化形成和發(fā)展具體機制的理解，以期找到治療肝纖維新的靶點。
　　方法：
　　以大鼠肝星狀細胞系HSC-T6為模型。先在低氧條件下培養(yǎng)細胞，不同時間點檢測 I型膠原和 III型膠原分泌的水平，并用蛋白印跡技術（westernblot）和免疫熒光染色技術分析α-平滑肌

3、肌動蛋白（α-SMA）表達水平，同時用westernblot和實時熒光定量PCR技術（RT-PCR）檢測HIF-1α和ROCK1的表達水平。接著設置常氧對照組與低氧實驗組，通過向肝星狀細胞轉(zhuǎn)染小干擾RNA降低HIF-1α的表達，用westernblot和RT-PCR檢測α-SMA和I型膠原的水平，Elisa檢測細胞上清中III型膠原的濃度。下一步，分組向細胞中加入 ROCK1特異性抑制劑降低 ROCK1表達，分析常氧情況下和低氧情況下，

4、α-SMA、I型膠原的水平以及III型膠原的變化程度。最后，將細胞分為空白對照組，轉(zhuǎn)染對照組，轉(zhuǎn)染siHIF-1α組和ROCK1抑制劑組，用MTT試驗測試低氧條件下細胞的增值情況。
　　結果：
　　低氧條件下培養(yǎng)肝星狀細胞，在0h，12h，48h檢測I型膠原、III型膠原表達逐漸上升，也發(fā)現(xiàn)α-SMA表達升高，同時HIF-1α和ROCK1隨著時間延長其水平也呈現(xiàn)提高。在低氧下，轉(zhuǎn)染HIF-1α后，α-SMA和I型膠原表達受到

5、抑制，降低了III型膠原分泌，并且ROCK1的蛋白和mRNA水平也出現(xiàn)下調(diào)。HSC-T6細胞中加入ROCK1特異性抑制劑，發(fā)現(xiàn)細胞活性降低，α-SMA和I型膠原表達程度下調(diào)，III型膠原分泌減少，而且HIF-1α的蛋白和mRNA也明顯抑制。最后，發(fā)現(xiàn)降低HIF-1α水平和加入ROCK1抑制劑后，降低了細胞的增值。
　　結論：
　　研究發(fā)現(xiàn)低氧條件下，大鼠肝星狀細胞增值和膠原合成過程中HIF-1α和ROCK1的聯(lián)系發(fā)揮著重要的