1、目的:急性百草枯（Paraquat，PQ）中毒和膿毒癥(Sepsis)是急診科常見的急危重癥。無論是急性PQ中毒的氧化損傷，還是膿毒癥的病原體感染，均可引發(fā)過度炎癥反應，從而導致多臟器功能不全甚至死亡，目前尚無特效的治療手段。組蛋白的乙?；揎検茄芯恳呻y復雜疾病發(fā)病機制及治療的重要路徑，組蛋白去乙?；?histone deacetylase，HDAC)是維持組蛋白乙?；癄顟B(tài)的關鍵酶，參與免疫細胞（如巨噬細胞）的激活、促炎及抗炎信號的轉

2、導等過程，影響巨噬細胞的功能表型或者極化狀態(tài)(M1/M2)之間的轉換。本研究分別用PQ和脂多糖(Lipopolysaccharide，LPS)作為刺激因素，分析HDAC抑制劑丙戊酸(Valproicacid，VPA)對二者誘導巨噬細胞炎性極化的作用及異同點，進而探索損傷和感染誘導的炎癥反應可能機制及治療靶點。
　　方法:將小鼠巨噬細胞RAW264.7置于37℃、5％CO2飽和濕度的孵箱中培養(yǎng)，經過穩(wěn)定傳代后，細胞生長約80％接觸率

3、時，進行如下兩部分實驗:實驗一:分別以不同濃度的HDACⅠ（VPA、Apicidin及MC1568）處理巨噬細胞，并于1h、2h和8h檢測細胞存活率，選擇不導致巨噬細胞死亡的HDACⅠ最佳濃度進行實驗二;實驗二:分別給予巨噬細胞如下處理因素:PQ、PQ+VPA（HDACⅠ和Ⅱa類抑制劑）、PQ+Apicidin（HDACⅠ類抑制劑）、PQ+MC1568(HDACⅡa類抑制劑)、LPS、LPS+VPA、LPS+Apicidin及LPS+M

4、C1568，于8h后收集以上各組細胞上清及細胞團進行如下檢測:ELISA檢測巨噬細胞M1型標志物(TNF-α)和M2標志物(IL-10)的表達;RT-PCR檢測巨噬細胞M1型標志物(CD16 mRNA及iNOSmRNA)和M2型標志物(CD206 mRNA及Arg-1mRNA)的表達;流式細胞檢測巨噬細胞M1型標志物(NOS2)及M2標志物(Arg-1)的表達。
　　結果:通過實驗一選擇3mM的VPA，0.01μM的Apicidi

5、n和10μM的MC1568用于實驗二。通過實驗二，我們發(fā)現PQ和LPS皆升高全部4個M1型標志物（CD16 mRNA、iNOS mRNA、TNF-α及iNOS）和M2型標志物（Arg-1）的表達，此外，PQ和LPS還分別增加M2型標志物(CD206 mRNA)和(IL-10)的表達。與PQ作用的巨噬細胞相比，PQ+VPA降低2個M1型標志物（iNOS mRNA及TNF-α）和1個M2型標志物(IL-10)水平;PQ+Apicidin降低

6、3個M1型標志物（CD16 mRNA、iNOS mRNA及TNF-α）和1個M2型標志物（Arg-1 mRNA）水平，同時還升高1個M2型標志物（Arg-1）水平;PQ+MC1568降低3個M1型標志物（CD16 mRNA、iNOS mRNA及TNF-α）和3個M2型標志物(CD206mRNA、Arg-1 mRNA及Arg-1)水平，三者的總體效應均是抑制M1極化，由強到弱依次為Apicidin＞VPA＞MC1568。與LPS作用的巨噬

7、細胞相比，LPS+VPA降低全部4個M1型標志物和1個M2型標志物（Arg-1）水平，同時還升高1個M2型標志物（IL-10）水平;LPS+Apicidin降低全部4個M1型標志物和2個M2型標志物（IL-10及Arg-1）水平;LPS+MC1568降低全部4個M1型標志物水平，同時還升高2個M2型標志物（Arg-1及IL-10）水平，三者的總體效應均是抑制M1極化，由強到弱依次為MC1568＞VPA＞Apicidin。
　　結論