1、目的: 早期生長(zhǎng)反應(yīng)因子-1(early growth response-1，Egr-1)是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，調(diào)控著多種與細(xì)胞增殖相關(guān)基因的表達(dá)，從而促進(jìn)細(xì)胞的增殖和遷移。細(xì)胞增殖核抗原(proliferating cell nuclear antigen，PCNA)在細(xì)胞周期的G1晚期開(kāi)始增加，S期達(dá)高峰，對(duì)血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)增殖進(jìn)行著精細(xì)的調(diào)控，其表達(dá)水

2、平與細(xì)胞增殖程度成正比，因此檢測(cè)PCNA是評(píng)價(jià)細(xì)胞增殖狀態(tài)的可靠指標(biāo)。脫氧核酶(deoxyribozyme/DNA enzyme，DRz)是繼核酶后發(fā)現(xiàn)的具有酶活性的脫氧核糖分子，它具有磷酸酯酶活性，可催化剪切特異的RNA。本實(shí)驗(yàn)采用Egr-1特異脫氧核酶(10-23 DNA Enzyme，ED5)對(duì)體外培養(yǎng)的大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染，然后觀察其對(duì)Egr-1及PCNA表達(dá)的影響，從而探討ED5抑制血管平滑肌細(xì)胞增殖的作用機(jī)制。

3、 方法: 取Wistar大鼠胸主動(dòng)脈中膜，用組織塊貼壁法進(jìn)行VSMCs原代培養(yǎng)、鑒定并傳代。本實(shí)驗(yàn)采用倒置相差顯微鏡法(形態(tài)學(xué)觀察)和α-平滑肌肌動(dòng)蛋白抗體(α-SM-actin)免疫細(xì)胞化學(xué)染色法共同進(jìn)行VSMCs的鑒定，證明成功培養(yǎng)的為高純度的血管平滑肌細(xì)胞，然后應(yīng)用FuGENE6轉(zhuǎn)染劑對(duì)VSMCs轉(zhuǎn)染ED5及ED5亂序雜碼寡核苷酸(ED5SCR)．并將實(shí)驗(yàn)分為三組：對(duì)照組、ED5組、ED5SCR組，然后根據(jù)轉(zhuǎn)染時(shí)間不同另

4、分亞組。采用免疫細(xì)胞化學(xué)法觀察轉(zhuǎn)染后Egr-1及PCNA表達(dá)的情況，并采用MetaMorph圖像分析系統(tǒng)分析計(jì)算各組積分光密度值大小，最后采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果: 成功完成原代VSMCs培養(yǎng)并轉(zhuǎn)染ED5及ED5SCR，然后根據(jù)轉(zhuǎn)染時(shí)間不同，分別觀察各組不同時(shí)間點(diǎn)的Egr-1及PCNA表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)：經(jīng)10％胎牛血清刺激后，三組內(nèi)Egr-11h即開(kāi)始表達(dá)，且表達(dá)最強(qiáng)，隨著時(shí)間的延長(zhǎng)呈下降趨勢(shì)；

5、PCNA在三組內(nèi)4h開(kāi)始表達(dá)，24h到最高峰，之后呈略下降趨勢(shì)。與對(duì)照組及ED5SCR組相比較，ED5組均在一定程度上抑制了Egr-1及PCNA的表達(dá)，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)通過(guò)SPSS12.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，證明有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。 結(jié)論: Egr-1是一種重要的核轉(zhuǎn)錄因子，可以促進(jìn)VSMCs增殖；對(duì)體外成功培養(yǎng)的高純度VSMCs進(jìn)行ED5轉(zhuǎn)染后，可以在一定程度上抑制Egr-1及PCNA表達(dá)。因此，ED5可以在一定