1、研究目的：多藥耐藥(multidrugresistance，MDR)是人急性白血病化療失敗的主要原因，其發(fā)生機制很多，其中一個重要因素是mdr-1基因及產(chǎn)物P-glycoprotein(P-gp)表達。核因子κB(NF-κB)是一個普遍存在的核轉(zhuǎn)錄因子，在炎癥應(yīng)激反應(yīng)和細胞生存中發(fā)揮重要作用。近來發(fā)現(xiàn)NF-κB在mdr-1的表達調(diào)控中起重要作用，但僅限于在細胞系中，尚未見在原代腫瘤細胞中關(guān)于NF-κB在mdr-1表達調(diào)控中作用的研究。本

2、實驗在初發(fā)急性髓細胞性白血病(AML)中篩選原發(fā)耐藥標(biāo)本，并在原發(fā)耐藥細胞中探討NF-κB在mdr-1轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的作用。 研究方法：初發(fā)AML病人骨髓或者外周血，單個核細胞分離，免疫細胞化學(xué)P-gp抗體染色檢測P-gp表達，流式細胞儀熒光染料羅丹明123(rhodamine123，Rho123)泵出實驗檢測P-gp功能，兩者聯(lián)合篩選原發(fā)耐藥AML標(biāo)本。設(shè)立對照組和實驗組，實驗組加入蛋白酶抑制劑MG-1321.0μmol/L，培養(yǎng)

3、6h后NF-κBP65抗體染色，激光共聚焦顯微鏡觀察NF-κB在細胞中分布，檢測其活性變化；real-timePCR方法檢測mdr-1mRNA；AnnexinV+7AAD雙標(biāo)，流式細胞儀檢測MG-1321.0μmol/L處理6h、12h細胞凋亡。 研究結(jié)果：36例初發(fā)的AML中，同時滿足免疫細胞化學(xué)染色實驗陽性和Rho123泵出實驗陽性的原發(fā)耐藥標(biāo)本11例，占全部標(biāo)本30.6％。MG-132處理6h，NF-κB在細胞核中分布明顯

4、減少，活性明顯受抑，mdr-1mRNA水平明顯減少，對照組mdr-1mRNA是實驗組4.3±2.3倍。MG-132處理12h細胞發(fā)生明顯凋亡，平均存活率為49±9％，低于12h對照組細胞的平均存活率79±3％(P＜0.01)；MG-132處理6h細胞凋亡發(fā)生不明顯，平均存活率為82±5％，6h對照組細胞平均存活率為86±5％，兩組無顯著性差異(P＞0.05)；MG-132處理12h組細胞平均存活率49±9％明顯低于6h組82±5％(P＜