1、本論文包括三個部分:(一)多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRPs)基因家族6個家族成員(MRP1-6)基因熒光定量RT-PCR的優(yōu)化;(二)兒童急性淋巴細胞白血病MRP1的表達及意義;(三)兒童急性淋巴細胞性白血病MRP2-6的表達及意義。
　　第一部分、多藥耐藥相關(guān)蛋白(MRPs)基因家族熒光定量RT-PCR的優(yōu)化
　　目的:通過定量PCR技術(shù)檢測MRP1-6基因mRNA在白血病細胞株中的表達水平,優(yōu)化熒光定量RT-PCR的條件,鑒定

2、引物的特異性,為研究MRP1-6基因在兒童急性淋巴細胞性細胞白血病(acute lymphoblastic leukemia, ALL)中的表達及意義提供基礎(chǔ)。
　　方法:培養(yǎng)和收集3株白血病細胞株為模板,提取總RNA,逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA,優(yōu)化實時定量RT-PCR條件,通過測定MRP1-6基因在各個細胞株中的表達水平和溶解曲線分析,鑒定MRP1-6基因引物的特異性。
　　結(jié)果:MRP1-6基因引物具有特異性,通過優(yōu)化熒光定量

3、 RT-PCR條件為研究MRPs在兒童ALL中的表達奠定了基礎(chǔ)。
　　第二部分、兒童急性淋巴細胞白血病MRP1基因的表達及臨床意義
　　目的:多藥耐藥相關(guān)蛋白基因(multidrug resistance associated protein-1,MRP1)在多種腫瘤中高表達,與腫瘤多藥耐藥具有密切相關(guān)性。通過定量 PCR檢測兒童急性淋巴細胞細胞白血病(acute lymphoblastic leukemia,ALL)MRP

4、1基因mRNA的表達水平,分析其在兒童ALL中的表達特點及臨床意義。
　　方法:收集2013年期間在蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院診斷和治療的ALL患兒146例(初診=67例,完全緩解=70例,復(fù)發(fā)=9例),10例特發(fā)性血小板減少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura,ITP)患兒骨髓為對照。應(yīng)用定量RT-PCR方法檢測MRP1基因的表達水平,利用SPSS18統(tǒng)計學(xué)軟件,分析MRP1基因表達水平與兒童

5、ALL臨床預(yù)后指標的相關(guān)性。
　　結(jié)果:(1)初診組和復(fù)發(fā)組MRP1的中位表達水平分別為5.82和8.49,明顯高于完全緩解組(1.99),P值均<0.05;其中復(fù)發(fā)組表達水平最高。(2) MRP1的表達水平與ALL危險程度具有密切相關(guān)性,低危組表達水平最低、中危組居中、高危組最高,中位數(shù)依次為4.28、5.62和7.56,中危組與標危組、高危組與標危組之間的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義,P值分別為0.015、0.007。(3)以中位表達水

6、平為界將初診患兒分為高、低表達量兩組,高表達組(n=34例)第7天強的松預(yù)處理敏感率為70.6％,而低表達組(n=33例)敏感率為90.9％,P=0.035;第33天骨髓完全緩解率高表達組為64.7％,低表達組為87.9％,P=0.026;第15天骨髓完全緩解率高表達組為68.8％,低表達組為69.7％, P=0.664。(4)初診T-ALL組(n=10例)MRP1的表達水平高于B-ALL組(n=57例),中位數(shù)分別為7.71和5.18

7、,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.007)。(5)單因素分析顯示MRP1 mRNA表達水平與患兒性別、年齡、初診時白細胞計數(shù)、血紅蛋白、血小板計數(shù)、外周血涂片幼稚細胞比例及骨髓涂片幼稚細胞比例無相關(guān)性。
　　結(jié)論:在兒童急性淋巴細胞性白血病中,MRP1的表達與免疫分型、治療反應(yīng)、危險程度及疾病復(fù)發(fā)密切相關(guān),是ALL預(yù)后差的有效指標。
　　第三部分、兒童急性淋巴細胞白血病MRP2-6的表達及臨床意義
　　目的:MRP2-6基因

8、在多種腫瘤中高表達,與腫瘤多藥耐藥具有密切相關(guān)性,目前有關(guān)它們在兒童 ALL中的表達及意義國內(nèi)鮮見報道,使用熒光定量 PCR檢測MRP2-6 mRNA在兒童ALL中的表達水平,分析其在兒童ALL中的表達特點及臨床預(yù)后指標的相關(guān)性。
　　方法:于2013年收集在蘇州大學(xué)附屬兒童醫(yī)院診斷和治療的ALL患兒133例(初診=56例,完全緩解=68例,復(fù)發(fā)=9例),10例特發(fā)性血小板減少性紫癜(idiopathic thrombocytop

9、enic purpura,ITP)患兒骨髓為對照。應(yīng)用定量RT-PCR方法檢測MRP2-6基因的表達水平,利用SPSS18統(tǒng)計學(xué)軟件,分析它們在兒童ALL預(yù)后指標的相關(guān)性。
　　結(jié)果:(1)初診組MRP2基因的中位表達水平最高(2.99),復(fù)發(fā)組次之(1.18)完全緩解組最低(1.17),但各組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義,P值分別為0.065和0.763;完全緩解組MRP3基因的中位表達水平為2.09,高于初診組、復(fù)發(fā)組,后兩者中位表達

10、水平分別為0.52和0.38,且初診組與完全緩解組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P值<0.001;MRP4在初診組和復(fù)發(fā)組的中位表達水平分別為2.46和5.47,均高于完全緩解組(1.64),差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P值分別為0.039、0.029,以復(fù)發(fā)組表達水平最高;MRP5的在兒童ALL中的表達模式與MRP4相似,其中位表達水平在初診組和復(fù)發(fā)組分別為1.60和3.84,高于完全緩解組(0.91),且差異有統(tǒng)計學(xué)意義,P值分別為0.003、0.0

11、02,以復(fù)發(fā)組表達水平最高; MRP6的中位表達水平在復(fù)發(fā)組最高,為2.0,高于初診組、完全緩解組,后二者分別為0.56和1.13,但差異無統(tǒng)計學(xué)意義。(2)最終危險程度分級顯示MRP2和MRP5的表達在中危組最高,分別為4.62和1.71,但與低危組、高危組比較沒有統(tǒng)計學(xué)意義;MRP4的中位表達水平以高危組最高,但與中危組、低危組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義。(3)以MRP2-6 mRNA中位表達水平為界,將初診ALL患兒分為高、低表達組,