1、動(dòng)物腸道菌群的微生態(tài)平衡與宿主的健康及疾病有著密切的關(guān)系?？股氐膽?yīng)用是導(dǎo)致動(dòng)物腸道菌群失調(diào)的主要原因之一。雙歧桿菌除了具有增強(qiáng)免疫、抗腫瘤和抗衰老等多種生理功能之外，其通過(guò)拮抗、抑制和營(yíng)養(yǎng)等作用能調(diào)整腸道菌群的平衡。本實(shí)驗(yàn)所用雙歧桿菌菌株BBMNo1源自世界第五長(zhǎng)壽之鄉(xiāng)-廣西巴馬瑤族自治縣長(zhǎng)壽老人糞便，其具有良好的耐酸耐膽鹽能力和人工胃腸液耐受性，并具有很好的細(xì)胞黏附性。為其運(yùn)用于實(shí)際生產(chǎn)，了解其對(duì)腸道菌群是否具有調(diào)節(jié)作用是必要的。

2、 目前考察益生菌株對(duì)小鼠腸道菌群影響運(yùn)用的檢測(cè)方法，主要是傳統(tǒng)分離培養(yǎng)法、傳統(tǒng)PCR定量法和實(shí)時(shí)熒光定量PCR法。本實(shí)驗(yàn)采用雙歧桿菌、乳桿菌、腸桿菌、腸球菌的特異性引物，并用SYBR Green進(jìn)行了實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)。30μL反應(yīng)體系組成確定為：SYBR(R)Green Realtime PCR Master Mix 15μL，上下游引物各1μL，模板2μL，蒸餾水12μL。反應(yīng)程序最終確定為：各細(xì)菌先經(jīng)過(guò)95℃5min的變

3、性，之后雙歧桿菌95℃15s，59℃30s，72℃30s共40個(gè)循環(huán)，乳桿菌95℃15s，61℃30s，72℃30s共40個(gè)循環(huán)，腸桿菌95℃15s，61℃30s，72℃30s共35個(gè)循環(huán)，腸球菌95℃15s，61℃30s，72℃30s共40個(gè)循環(huán)。在合適的條件下做出了標(biāo)準(zhǔn)曲線。 然后，用建立的實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)了BBMN01對(duì)小鼠腸道菌群的影響，結(jié)果顯示，BBMN01對(duì)正常小鼠腸道菌群具有改善作用，對(duì)已失調(diào)菌群具有顯著