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文檔簡介
1、Ets家族能編碼一大類轉(zhuǎn)錄因子。編碼的所有轉(zhuǎn)錄因子都有一個高度保守的含85個氨基酸的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域,被命名為ETS結(jié)構(gòu)域。它能特異性的識別并結(jié)合嘌呤豐富的DNA中心靶序列5ˊ-GGA(A/T)-3ˊ。根據(jù)轉(zhuǎn)錄因子的轉(zhuǎn)錄激活結(jié)構(gòu)域和ETS結(jié)構(gòu)域?qū)⑺械腅ts家族成員分成了四大類,每類包含幾個亞家族,每個亞家族又包含不同的成員。PEA3亞家族就屬于Ets家族,它包含三個家族成員:ER81/ETV1、PEA3/ETV4、ERM/ETV5。P
2、EA3亞家族的三個成員ETV1、ETV4、ETV5在Ets結(jié)構(gòu)域的同源性高達(dá)95%,在轉(zhuǎn)錄激活域的同源性高達(dá)85%。
粘著斑相關(guān)蛋白(FAAP,focal adhesion associated protein)是由小鼠D10Wsu52e基因編碼的。此蛋白約55KD,含505個氨基酸。FAAP存在于許多物種中且高度保守。在細(xì)菌和人中已鑒定出它的同源物分別為 RtcB和HSPC117。已有研究證明,RtcB是一種獨特的依賴GTP
3、的RNA連接酶和DNA連接酶。而HSPC117是人類tRNA連接酶復(fù)合體的必需亞單位。
通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)FAAP啟動子上含有8個PEA3結(jié)合位點??寺×薖EA3家族的三個成員ER81/ETV1、PEA3/ETV4、ERM/ETV5,以及3個熒光素酶報告基因 pGL2-492,pGL2-336,pGL2-276。pGL2-492含有全部的8個結(jié)合位點,pGL2-336含有4個結(jié)合位點,pGL2-276只含有1個結(jié)合位點。同
4、時將PEA3結(jié)合位點的核心序列 AGGA突變成 ATTT,克隆突變體 pGL2-m492、pGL2-m336、pGL2-m276。通過雙熒光素酶實驗發(fā)現(xiàn)ETV1、ETV4、ETV5都對pGL2-1317具有活性影響,且ETV4對pGL2-492、pGL2-336和pGL2-276也具有活性影響。最后,通過凝膠阻滯實驗也證實了PEA3與小鼠FAAP啟動子具有一定的結(jié)合作用。
總之,我們的研究表明PEA3能通過結(jié)合FAAP啟動子結(jié)
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