1、六聚組氨酸(6xHis)是一種融合蛋白純化和檢測的常用標簽，基于組氨酸與Ni<'2+>螯合作用，Ni-NTA(次氨基三乙酸)、Ni-IDA(亞氨基二乙酸)樹脂已被廣泛用于六聚組氨酸融合蛋白的純化。以羧甲基天冬氨酸(CM-ASP)為螯合配基的Co<'2+>螯合物對六聚組氨酸融合蛋白純化具有選擇性高、金屬離子不易脫落等特點。此外，通過抗6xHis抗體純化六聚組氨酸融合蛋白的方法受到了很多關注。本論文就六聚組氨酸融合蛋白的純化開展了較為系統(tǒng)的

2、研究，內容包括兩個方面：(1)合成了載有羧甲基天冬氨酸鈷離子螯合物的樹脂并建立了六聚組氨酸融合蛋白的純化方法。(2)制備了抗6xHis多克隆抗體，并初步將其用于六聚組氨酸融合蛋白的純化。 以Sepharose CL-6B為載體，環(huán)氧氯丙烷為活化劑，羧甲基天冬氨酸為螯合配基制備載有Co<'2+>的固定化金屬螯合親和層析介質(Co-CM-Asp-Sepharose)，將其用于六聚組氨酸融合蛋白的純化研究。優(yōu)化了200μL細胞裂解液中

3、六聚組氨酸融合蛋白純化所需介質用量，Co-CM-Asp-Sepharose與細胞裂解液的孵育時間，介質清洗溶液及靶蛋白洗脫液咪唑濃度等條件。比較了Co-CM-Asp-Sepharose與商品化Ni-NTA-Agarose(Qiagen公司)兩種螯合介質對融合蛋白的純化效果。開展了從5 mL細胞裂解液中純化六聚組氨酸融合蛋白CDl55D1的研究，并通過Bradford法測定了Co-CM-Asp-Sepharose對CDl55D1的純化量。

4、結果表明：對200μL細胞裂解液純化體系，Co-CM-Asp-Sepharose(50％懸浮液)的優(yōu)選體積為60μL，最佳孵育時間為30 min，洗脫液最佳咪唑濃度為200mmol/L。介質用量放大為1.5 mL(50％懸浮液)從5 mL細胞裂解液中純化CDl55D1可達4.6 mg。與商品化Ni-NTA-Agarose相比，載有Co<'2+>的固定化金屬螯合親和層析介質具有選擇性好，清洗條件簡單，得到的靶蛋白純度高等優(yōu)點。 以

5、碳二亞胺(EDC)介導，將6xHis與載體匙孔血藍蛋白(KLH)偶聯(lián)作為免疫原免疫新西蘭兔，所得抗血清經飽和硫酸銨沉淀，得到純度高的抗6×His多克隆抗體。將多抗通過共價作用固定于氨基末端磁性微粒表面，以磁性微粒為載體通過免疫親和原理對六聚組氨酸融合蛋白CD155D1的純化進行了初步研究，結果表明抗6xHis多克隆抗體可用于六聚組氨酸融合蛋白純化，但效率較低。除去多克隆抗體中針對載體蛋白的抗體是提高純化效率的一個關鍵環(huán)節(jié)，為此，通過免疫