1、目的：采用腹主動脈-下腔靜脈造瘺分流法構(gòu)建高肺血流肺動脈高壓大鼠模型，探究跨膜蛋白16A（TMEM16A）特異性抑制劑（T16Ainh-A01）對原代肺動脈平滑肌細胞增殖和細胞遷移的作用。
　　方法：30只SD大鼠采取數(shù)字表法隨機分為正常組、假手術(shù)組和模型組各10只。模型組通過腹主動脈-下腔靜脈造瘺分流法建立左向右分流的高肺血流肺動脈高壓模型；假手術(shù)組行簡單的開關(guān)腹手術(shù)；正常組不做任何處理。所有大鼠飼養(yǎng)11周后測定肺動脈壓力。肺組

2、織HE染色，光鏡下觀察肺動脈管壁情況；組織貼壁法分離大鼠肺動脈平滑肌細胞（PASMCs），細胞形態(tài)學(xué)、細胞免疫化學(xué)及免疫熒光法對PASMCs進行鑒定；免疫熒光法檢測TMEM16A在各組PASMCs上的表達；各組原代培養(yǎng)的PASMCs分別在10μM、20μM和50μM T16Ainh-A01干預(yù)下培養(yǎng)24 h，用CCK-8法檢測細胞增殖情況；transwell小室法檢測各組 PASMCs分別在20μM和50μM T16Ainh-A01干預(yù)

3、24 h后細胞遷移數(shù)的情況。
　　結(jié)果：⑴大鼠肺動脈壓力:模型組肺動脈收縮壓、舒張壓及平均壓分別較正常組、假手術(shù)組的均顯劇升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。而正常組與假手術(shù)比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。提示通過分流手術(shù)成功建立高肺血流性肺動脈高壓大鼠模型。⑵HE肺組織染色病理檢查可見模型組肺小動脈管壁明顯增厚、管腔明顯狹窄，而正常組及假手術(shù)組無此病理改變。⑶倒置顯微鏡下PASMCs以長梭形為主，胞核卵圓形，部分細

4、胞重疊區(qū)域呈典型“峰-谷”狀結(jié)構(gòu)。免疫學(xué)檢測顯示胞漿內(nèi)可見PASMCs特有的被染成棕黃色和標記紅色熒光的肌絲，而胞核不染色。⑷免疫熒光檢測各組PASMCs胞膜上均可見標記TMEM16A的綠色熒光，模型組綠色熒光范圍較正常組及假手術(shù)組廣。⑸細胞增殖：10μM T16Ainh-A01干預(yù)各組PASMCs24 h后細胞活力（％）比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；20μM T16Ainh-A01干預(yù)各組PASMCs24 h后細胞活力（%）差

5、異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）:模型組細胞活力（%）（88.82±1.92），較正常組（92.21±1.25）明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），而較假手術(shù)組（90.42±3.12）無明顯下降，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），正常組與假手術(shù)組比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）;50μM T16Ainh-A01干預(yù)各組PASMCs24 h后細胞活力（%）差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）:模型組細胞活力（%）（74.48±5.

6、95），較正常組（87.41±3.27）、假手術(shù)組（83.73±4.05）均明顯下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），而正常組與假手術(shù)組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。⑹細胞遷移：20μM T16Ainh-A01干預(yù)各組PASMCs24 h后遷移細胞數(shù)比較，正常干預(yù)組細胞遷移數(shù)（n）(76.25±2.87)、假手術(shù)干預(yù)組細胞遷移數(shù)(n)(81.75±2.06)，分別較正常不干預(yù)組(83.75±1.26)、假手術(shù)不干預(yù)組(88.7

7、5±2.21)均減少，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）,而模型干預(yù)組細胞遷移數(shù)(n)(92.25±4.27)較模型不干預(yù)組(123.75±3.77)明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。同時模型組抑制率（%）（25.32±5.72），較正常組（8.98±2.21）、假手術(shù)組（7.85±2.88）均顯劇升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01），而正常組和假手術(shù)組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）；50μM T16Ainh-A01干預(yù)

8、各組PASMCs24 h后遷移細胞數(shù)比較，正常干預(yù)組細胞遷移數(shù)（n）(63.00±8.49)、假手術(shù)干預(yù)組細胞遷移數(shù)(n)(64.00±8.83)，分別較正常不干預(yù)組(86.25±4.40)、假手術(shù)不干預(yù)組(86.25±4.57)均減少，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），而模型干預(yù)組細胞遷移數(shù)(n)(72.25±9.05)，較不干預(yù)組(135.75±6.23)明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）。同時模型組抑制率（%）（46.7

9、8±6.31），較正常組（%）（27.10±7.64）、假手術(shù)組（%）（25.92±8.15）均顯劇升高，差異均有統(tǒng)計學(xué)有意義（P<0.01），而正常組和假手術(shù)組差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：①TMEM16A在肺動脈高壓大鼠PASMCs上表達增高，通過調(diào)控細胞增殖和細胞遷移可能參與肺血管重塑及高肺血流性肺動脈高壓的形成。②通過抑制TMEM16A活性，T16Ainh-A01對高肺血流性肺動脈高壓大鼠PASMCs增殖和