1、背景和目的：
　　胃癌是世界第五大最常見的惡性腫瘤,在腫瘤相關(guān)疾病死亡原因中高居第三位，每年新增病例近100萬。由此帶來的經(jīng)濟負擔70％落在發(fā)展中國家，尤其是亞洲地區(qū)。幽門螺桿菌（Helicobacter pylori，Hp）感染是胃癌發(fā)生最主要的危險因素，目前大多數(shù)學者認為Hp感染在經(jīng)典胃黏膜癌變過程，即非萎縮性胃炎-腸上皮化生-異型增生-胃癌過程中起著始發(fā)和推動作用，但Hp感染致病確切機制目前仍不清楚。大量相關(guān)研究表明，Hp感

2、染后核轉(zhuǎn)錄因子κB（Nuclear factor-kappa B,NF-κB）信號通路呈激活狀態(tài)，NF-κB的活化與Hp相關(guān)胃炎、胃潰瘍及胃癌的發(fā)生發(fā)展及生存預后均密切相關(guān)。NF-κB是一種多功能核轉(zhuǎn)錄因子，靜息狀態(tài)時，NF-κB二聚體p50/p65與其抑制蛋白(inhibitor of nuclear factor-kappa B,IκB)結(jié)合形成復合體，以無活性狀態(tài)存在于細胞質(zhì)中。受到外界刺激后，IκB被磷酸化，隨后泛素化被蛋白酶體

3、降解，與NF-κB解聚后暴露出NF-κB的核定位序列（nuclear localization sequence，NLS）從而解除抑制作用，隨后p65從胞漿中轉(zhuǎn)入胞核中調(diào)控多種基因轉(zhuǎn)錄，進而在炎癥、免疫、腫瘤中發(fā)揮重要作用。因此，闡明Hp感染后NF-κB具體活化及調(diào)控機制可為臨床胃癌的防治提供新的思路。
　　RACK1是色氨酸-天冬氨酸(tryptophan-aspartic acid40，WD40)重復序列家族的成員之一，由于該

4、特殊結(jié)構(gòu)，可與胞內(nèi)多種信號相關(guān)蛋白如激酶、膜受體、離子通道、凋亡相關(guān)分子及核糖體等結(jié)合，從而在炎癥、細胞遷移、凋亡及腫瘤發(fā)生中發(fā)揮重要作用。最新研究發(fā)現(xiàn)RACK1是一種新的NF-κB信號通路負性調(diào)控因子，并且早在2001年已被證實能夠與Hp毒力因子VacA相互作用。因此，我們推測RACK1可能在Hp感染致NF-κB信號通路的激活中發(fā)揮一定作用。為此，針對我們提出的假設(shè)，本課題采用免疫組織化學檢測人體胃黏膜癌變組織，旨在初步探討RACK1

5、與NF-κB信號通路相關(guān)蛋白在Hp相關(guān)胃黏膜病變中表達變化及其相關(guān)性，并進一步在細胞實驗中驗證Hp感染后RACK1與NF-κB信號通路相關(guān)蛋白變化趨勢與組織中是否一致。如實驗達到預期，可為進一步闡明RACK1在Hp感染致NF-κB激活中的作用及機制提供理論基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.收集慢性非萎縮性胃炎、腸上皮化生、異型增生、早期胃癌和進展期胃癌病理標本（每組40例，共200例，前三組中Hp陽性與陰性各20例），免疫組織化學

6、方法檢測RACK1、IκBα和p-IκBα蛋白的表達。
　　2. ATCC43504 Hp菌株（MOI=50：1）作用GES-1細胞后，分別于0h、30min、45min、1h、3h和6h不同時間點，采用Western blot方法檢測RACK1、p65、p-p65（Ser276）及p-p65（Ser536）蛋白的表達情況。
　　結(jié)果：
　　1.人胃黏膜癌變過程中RACK1、IκBα和p-IκBα的表達情況及其相關(guān)性分

7、析
　?。?）RACK1表達：在慢性非萎縮性胃炎組表達最高，隨著胃黏膜病變的進展呈下降趨勢（p<0.01），在早期胃癌組和進展期胃癌組較低水平表達，兩組間差異無統(tǒng)計學意義（75%vs62.5%，p>0.05）。進一步將慢性非萎縮性胃炎組、癌前病變組（腸上皮化生和異型增生）分為Hp陽性組和Hp陰性組，Hp陽性組與Hp陰性組各病變階段RACK1表達均呈下降趨勢，差異有統(tǒng)計學意義（100%vs87.5%；90%vs90%，p<0.05）

8、。
　?。?）IκBα表達：在慢性非萎縮性胃炎組表達最高，隨著胃黏膜病變的進展呈下降趨勢（p<0.01），在早期胃癌組和進展期胃癌組表達較低，兩組間無顯著差異（47.5%vs45%，p>0.05）。將慢性非萎縮性胃炎組、癌前病變組（腸上皮化生和異型增生）分為Hp陽性組和Hp陰性組，Hp陽性組IκBα蛋白各病變階段間表達均呈下降趨勢，差異有統(tǒng)計學意義（100%vs72.5%，p<0.01）。而Hp陰性組IκBα表達各階段無明顯差異（

9、85%vs67.5%，p>0.05）。
　　p-IκBα表達：在慢性非萎縮性胃炎組表達最低，隨胃黏膜病變進展呈上升趨勢（p<0.01），在早期胃癌組和進展期胃癌組較高水平表達，兩組間差異無統(tǒng)計學意義（62.5%vs45%，p>0.05）。將慢性非萎縮性胃炎組、癌前病變組（腸上皮化生和異型增生）分為Hp陽性組和Hp陰性組，Hp陽性組各病變階段p-IκBα無顯著性差異（45%vs75%，p>0.05），而Hp陰性組中癌前病變組p-Iκ

10、Bα蛋白表達高于慢性非萎縮性胃炎組，有顯著差異（40%vs77.5%，p<0.01）。
　?。?）與Hp感染的關(guān)系：將慢性非萎縮性胃炎組、癌前病變組各自分為Hp陽性和陰性組，進行組間比較。結(jié)果顯示在胃黏膜病變早期階段，Hp陽性組RACK1顯著高于Hp陰性組，差異有統(tǒng)計學意義（100%vs90%；87.5 vs90%，p<0.05），而Hp陽性和陰性組間IκBα與p-IκBα蛋白表達無顯著性差異（p>0.05）。
　?。?）胃

11、癌組織中RACK1與IκBα、p-IκBα表達的關(guān)系：胃癌組織中RACK1與IκBα蛋白表達正相關(guān)（p<0.01），與p-IκBα負相關(guān)，差異均有統(tǒng)計學差異（p<0.01）。
　　2. Hp作用GES-1后RACK1與NF-κB信號通路相關(guān)蛋白表達情況
　　Hp活菌（MOI=50：1）作用GES-1細胞后，RACK1表達量在作用后30min開始升高，3h達到高峰（p<0.01），6h開始下降（p<0.05）。NF-κB信號通

12、路相關(guān)蛋白中p65表達無明顯變化（p>0.05），而p-p65(Ser276)蛋白表達水平在各時間點均明顯升高，30min開始升高，3h達到高峰（p<0.01），6h內(nèi)均高于0h（p<0.05），p-p65(Ser536)表達水平在3h顯著升高（p<0.01），作用6h時仍高于0h（p<0.05），
　　結(jié)論：
　　1. RACK1表達下調(diào)和NF-κB信號通路活化可能參與了胃黏膜癌變過程。
　　2. Hp感染相關(guān)胃粘膜