1、目的:
　　本實驗研究通過基因、蛋白水平研究鹽酸小檗堿對LPS誘導巨噬細胞RAW264.7的體外抗炎作用，以及從NF-κB和MAPK信號轉導通路和COX-2介導的級聯(lián)反應來研究其抗炎的分子作用機制，初步探討鹽酸小檗堿的抗炎作用機制。
　　方法:
　　1、用0.1μg/mL的LPS刺激小鼠巨噬細胞RAW264.7細胞，使其發(fā)生炎癥反應。18h后檢測細胞上清液中TNF-α，IL-6炎癥因子的表達量來確定炎癥模型的構建。

2、r>　　2、MTT法檢測鹽酸小檗堿低、中、高濃度（5、10、15μg/mL）對小鼠巨噬細胞RAW264.7細胞的細胞毒性。
　　3、分別給予不同濃度的鹽酸小檗堿預作用于巨噬細胞RAW264.73 h后，再加入LPS至其終濃度為0.1μg/mL共同作用細胞18h后收集細胞上清液，分別用ELISA、qPCR方法從蛋白和基因水平檢測細胞炎癥介質Mincle、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-10表達量。
　　4、Wester

3、n blot法檢測鹽酸小檗堿對NF-κB信號通路中的IκB-α磷酸化蛋白（p-IκB-α）、IκB-α總蛋白(Iκ B-α)、p65磷酸化蛋白(p-p65)、p65總蛋白(p65)表達的影響及MAPK信號通路中的起主要作用的ERK1/2磷酸化蛋白(p-ERK1/2)、ERK1/2總蛋白(ERK1/2)、JNK1/2磷酸化蛋白(p-JNK1/2)、JNK1/2總蛋白(JNK1/2)、p38磷酸化蛋白(p-p38)、p38總蛋白(p38)表

4、達的影響。
　　5、Western blot法檢測鹽酸小檗堿對花生四烯酸裂解為前列腺素(PG)過程中的一類重要的限速酶COX-2的作用及用ELISA方法檢測鹽酸小檗堿對其下游釋放的NO、PGE2的作用。
　　結果:
　　1、小鼠巨噬細胞RAW264.7被0.1μg/mL LPS誘導后，細胞炎癥反應模型成功建立，模型細胞細胞培養(yǎng)上清液中的TNF-α、IL-6炎性因子的表達量明顯升高，與正常組比較存在著顯著性差異(P＜0.

5、01)。
　　2、鹽酸小檗堿低、中、高濃度（5、10、15μg/mL）對RAW264.7細胞的幾乎沒有細胞毒性時，與正常組細胞相比較，細胞相對活力均大于90％。
　　3、與LPS炎癥模型組比較，在蛋白和基因水平，不同濃度的鹽酸小檗堿都能夠顯著性地降低LPS誘導的RAW264.7炎癥細胞培養(yǎng)上清液中TNF-α、IL-1β和IL-6細胞促炎癥因子的表達量和顯著性提高LPS誘導巨噬細胞中抗炎因子IL-10的表達，此外還能夠在mRN

6、A上抑制Mincle的表達(P＜0.05)。
　　4、對鹽酸小檗堿抗炎分子作用機制進行了研究，研究結果顯示鹽酸小檗堿能夠顯著性地降低NF-κB信號通路中p65蛋白磷酸化水平、IκB-α磷酸化水平，提高IκB-α總蛋白表達水平(P＜0.01);顯著性降低MAPK信號通路中ERK1/2、JNK1/2蛋白的磷酸化水平，顯著性地提高ERK1/2、JNK1/2總蛋白的表達水平(P＜0.01);但對p38蛋白幾乎沒有作用。
　　5、鹽酸

7、小檗堿能夠顯著性降低LPS誘導巨噬細胞中COX-2蛋白、NO、PGE2的表達，且呈劑量關系(P＜0.01)。
　　結論:
　　在體外用0.1μg/mL的LPS成功構建了巨噬細胞RAW264.7炎癥的反應模型，并且低、中、高不同濃度的鹽酸小檗堿都能夠顯著性地抑制促炎因子的表達量且顯著性地提高一些抗炎因子的表達水平，這些結果提示鹽酸小檗堿在體外實驗中有很好的抗炎作用。進一步對其抗炎的信號通路進行研究結果表明，鹽酸小檗堿對MAPK