1、胸膜肺炎放線桿菌是無芽孢多形性球狀短桿菌，能引起豬呼吸系統(tǒng)疾病，具有高死亡和高傳染等特點，臨床上主要表現(xiàn)為肺部炎癥和呼吸系統(tǒng)功能障礙，常呈暴發(fā)性流行，并常與多種細(xì)菌混合感染。鹽酸小檗堿是從黃連等植物中提取的季胺型異喹啉類生物堿，對多種革蘭氏陽性、陰性菌均有較好的抑制和殺滅效果。本文擬研究鹽酸小檗堿對該菌的抑制和殺滅效果并初步闡明作用機(jī)制。主要研究結(jié)果如下：
　　1.鹽酸小檗堿的體外抑菌效果的研究:采用二倍稀釋法，測定鹽酸小檗堿對豬

2、胸膜肺炎放線桿菌的最低抑菌濃度(Minimal inhibitory concentration，MIC)和最小殺菌濃度(Minimal bactericidal concentration，MBC)，并繪制其抑菌曲線。結(jié)果表明:鹽酸小檗堿對豬胸膜肺炎放線桿菌具有較好的體外殺滅效果，其MIC和MBC均為0.3125 mg/mL;當(dāng)鹽酸小檗堿濃度為MIC時，細(xì)菌在8h內(nèi)全部死亡，濃度為1/2 MIC及以下時，細(xì)菌生長受到明顯抑制，但生長曲

3、線與正常組相似，表明鹽酸小檗堿對豬胸膜肺炎放線桿菌存在劑量依賴而非時間依性。以上結(jié)果表明鹽酸小檗堿對豬的胸膜肺炎放線桿菌具有較好的體外殺菌效果。
　　2.鹽酸小檗堿對豬胸膜肺炎放線桿菌細(xì)胞膜的影響:通過測定大分子物質(zhì)和Ca，Mg，K離子的泄漏判斷細(xì)胞膜的完整性，并對膜上蛋白進(jìn)行熒光分析;測定還原糖的利用情況和采用氮苯基-1-萘胺(N-Phenyl-1-Napthylamine，NPN)法判斷細(xì)胞膜的滲透性;通過測量乳酸脫氫酶(Al

4、kaline phosphatase，LDH)和堿性磷酸酶(Alkalinephosphatase，AKP)的體外活性判斷藥物對細(xì)菌細(xì)胞壁完整性的影響。結(jié)果表明:鹽酸小檗堿作用于細(xì)菌后，在前10 min內(nèi)，大分子物質(zhì)DNA胞外濃度變化不顯著，1～12h內(nèi)，胞外DNA濃度和蛋白質(zhì)濃度先上升后下降，Ca，Mg，K離子胞外濃度升高，離子泄露，表明鹽酸小檗堿能夠破壞細(xì)胞膜的完整性和滲透性。胞外LDH和AKP的活性與對照組相比變化不明顯。膜蛋白熒

5、光結(jié)果顯示，鹽酸小檗堿能與細(xì)胞膜上的色氨酸殘基相結(jié)合，引起細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)發(fā)生改變，其淬滅方式為靜態(tài)淬滅。以上結(jié)果表明鹽酸小檗堿能夠影響胸膜肺炎放線桿菌細(xì)胞膜的完整性和滲透性，與膜上的某些蛋白質(zhì)結(jié)合從而影響蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)與功能。
　　3.鹽酸小檗堿對豬胸膜肺炎放線桿菌蛋白質(zhì)表達(dá)的影響:通過測定細(xì)菌總蛋白含量的變化及SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(Sodium dodecyl sμLphate polyacrylamidegel-electro

6、phoresis，SDS-PAGE)測定細(xì)菌蛋白表達(dá)的差異，研究鹽酸小檗堿對細(xì)菌蛋白質(zhì)合成的影響。結(jié)果表明:鹽酸小檗堿引起細(xì)菌總蛋白的表達(dá)量先升高后降低正常組蛋白質(zhì)條帶多而清晰，藥物作用后蛋白表達(dá)出現(xiàn)差異，一些蛋白條帶變暗甚至消失，推測44.3kDa以下的蛋白質(zhì)可能為鹽酸小檗堿的作用靶點。以上結(jié)果表明鹽酸小檗堿使得細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成和表達(dá)下降。
　　4.鹽酸小檗堿對豬胸膜肺炎放線桿菌DNA合成的影響:通過4'，6-二脒基-2-苯基吲

7、哚（4'，6-diamidino-2-phenylindole，DAPI）染色，紫外吸收光譜，瓊脂糖凝膠電泳，EB-DNA（溴化乙錠-DNA）體系，熱溶解曲線等方法檢測細(xì)菌DNA在藥物作用前后表達(dá)量的變化及DNA與鹽酸小檗堿的體外結(jié)合狀態(tài)，研究鹽酸小檗堿對細(xì)菌DNA的影響。熒光染色結(jié)果表明，正常組熒光強度較強，數(shù)目較多，藥物作用組熒光強度降低，表明鹽酸小檗堿能夠影響細(xì)菌DNA的表達(dá)。紫外吸收光譜的改變和瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果表明，鹽酸小檗堿