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![蛋白質(zhì)在疏水性相互作用色譜介質(zhì)上吸附的量熱學(xué)研究.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-2/24/12/a507fb6f-fde8-4e66-a168-3b2b38c45f99/a507fb6f-fde8-4e66-a168-3b2b38c45f991.gif)
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文檔簡介
1、疏水性相互作用色譜(HIC)是一種有效的色譜分離手段,被廣泛地應(yīng)用于蛋白質(zhì)等生物大分子和生物納米顆粒的純化中?,F(xiàn)有的研究表明,蛋白質(zhì)在HIC色譜介質(zhì)上的吸附可能導(dǎo)致蛋白構(gòu)象的改變和活性的降低。本文利用等溫滴定量熱儀和van't Hoff分析法,通過對牛血清白蛋白(BSA)在HIC色譜介質(zhì)PhenylSepharose6 Fast Flow上吸附過程的量熱分析研究蛋白構(gòu)象的變化行為。主要研究內(nèi)容如下:
一、使用間歇搖瓶法考察
2、了鹽種類、鹽濃度、配基密度、溫度條件對BSA在HIC介質(zhì)上靜態(tài)吸附平衡特性的影響,結(jié)果表明:Na2SO4對吸附的促進作用強于(NH4)2SO4;提高鹽濃度和配基密度能夠促進吸附:溫度在18℃到25℃之間,BSA在HIC介質(zhì)上的吸附是吸附主導(dǎo)的過程(adsorption-dominated process),25℃到35℃之間,是分配主導(dǎo)的過程(partition-dominated process)。
二、使用等溫滴定量熱
3、法(ITC)測量得到BSA在HIC介質(zhì)上吸附過程的熱量變化,并計算得到吸附過程的吉布斯自由能變ΔG,焓變ΔH,熵變ΔS,通過分析,得出結(jié)論:1、BSA在HIC介質(zhì)上吸附的過程存在焓熵補償(EEC)現(xiàn)象。吸附作用較弱時,焓變一部分用于補償不利的熵變,一部分驅(qū)動吸附的進行;吸附作用越強,焓變對熵變的補償程度越低;最后,焓變和熵變共同驅(qū)動吸附的進行。2、BSA在HIC介質(zhì)上吸附的過程中發(fā)生了較大的構(gòu)象變化,并伴隨著水分子的釋放,該過程對整個吸
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