1、單核細胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes，簡稱“單增李斯特菌”），在自然界分布廣泛，能引起人和反芻動物的感染。作為食源性致病菌，可以通過污染多種食物而傳播，如各種肉類、奶類、海產品等，人誤食被污染的食品而感染李斯特菌病。
　　單增李斯特菌對環(huán)境應激具有較強的適應性，能夠在寬泛的溫度、低pH、低水活度以及高鹽條件下存活。因為其擁有一套精密的抗應激調控機制，能夠在遭遇環(huán)境變化時調控一系列抗應激基因的表達。Si

2、gma B(σB)作為一種應激調控因子存在于不同種的革蘭氏陽性菌，如單增李斯特菌、枯草芽孢桿菌和葡萄球菌，在抗應激過程中發(fā)揮重要作用。σB抗應激調控網絡在枯草芽孢桿菌中研究的較為透徹?？莶菅挎邨U菌中σB的活力受到一系列Rsb蛋白的調控。這些Rsb蛋白中包含蛋白磷酸酶和磷酸激酶，整個調控渠道通過磷酸化和去磷酸化來實現。李斯特菌擁有與枯草芽孢桿菌類似的Rsb基因簇，但其對環(huán)境應激的調控機制研究尚淺。
　　本研究旨在:(1)利用單增李斯

3、特菌rsbS缺失株，探究rsbS基因對單增李斯特菌抗鹽應激的影響;(2)獲得具有σB依賴型啟動子和綠色熒光蛋白基因（gfp）融合的報告質粒，以探究單增李斯特菌應激環(huán)境中的σB活性;(3)探明rsbS基因在單增李斯特菌在鹽應激條件下對SigB表達的調節(jié)。
　　研究結果表明:ΔrsbS在正常培養(yǎng)條件下的生長能力與野生株10403S相似，兩者相比差異不顯著，但ΔrsbS在5％NaC1應激條件下的生長能力卻明顯降低，且極顯著低于野生株的生

4、長能力(P＜0.01)，此外，ΔrsbS在高鹽應激(15％NaCl)培養(yǎng)基中的存活率與野生株相比也存在著極顯著的差異(P＜0.01)，提示RsbS介導該菌在鹽應激環(huán)境中的生長能力和存活。在正常培養(yǎng)條件下，對ΔrsbS生物被膜和溶血溶脂特性進行檢測，發(fā)現ΔrsbS的生物被膜形成能力與野生株相比，差異極顯著(P＜0.05)，表明rsbS能夠介導細菌生物被膜的形成，但不影響細菌的溶血和溶脂能力。
　　為了探究RsbS對單增李斯特菌抗應激

5、過程中σB表達水平的影響，構建了攜帶σB依賴型啟動子和gfp融合的報告質粒pERL3-PsigB-gfp，該報告質粒能夠直接、準確地反應σB的表達水平。結果表明，鹽應激一定時間后，ΔrsbS中檢測到的GFP熒光值信號極顯著低于野生株（P＜0.01），進一步對細菌轉錄水平和蛋白水平進行檢測，發(fā)現在ΔrsbS中幾乎檢測不到σB的表達，且ΔrsbS中σB的轉錄水平和蛋白水平均極顯著低于野生株(P＜0.01)，提示rsbS能夠顯著介導應激環(huán)境中