1、背景：
　　前列腺癌占西方發(fā)達國家男性惡性腫瘤發(fā)病率首位，近年來在中國的發(fā)病率也逐年上升。大部分的前列腺癌屬于相對惰性的腫瘤，然而部分前列腺癌進展迅速，并很快發(fā)生轉(zhuǎn)移威脅病人生命，如何區(qū)分這部分進展迅速的病人，研究前列腺癌增殖進展的分子機制，對提高前列腺癌病人的生存率意義重大。
　　早期研究者將NKAIN2命名為T細胞淋巴瘤斷裂位點相關靶點1(T-cell lymphoma breakpoint associated tar

2、get1(TCBA1))，基于能與鈉鉀泵β1亞基相互作用(Na，K-ATPase)而被命名為鈉鉀泵相互作用因子2，屬于NKAIN跨膜蛋白超家族的一員。課題組前期通過高通量SNP芯片分析發(fā)現(xiàn)NKAIN2在前列腺癌標本中發(fā)生斷裂及缺失，推測NKAIN2可能是抑癌基因。進一步通過分析大量前列腺癌樣本，發(fā)現(xiàn)前列腺癌中，尤其是中國的病例中，NKAIN2經(jīng)常通過缺失及斷裂發(fā)生失活，并且通過體外細胞實驗證明NKAIN2能夠抑制腫瘤細胞的增殖、遷移和侵

3、襲，并促進腫瘤細胞凋亡。
　　鈉鉀泵在腫瘤中的作用已經(jīng)引起了廣泛關注，很多研究發(fā)現(xiàn)其在多種腫瘤中活性增強，而鈉鉀泵抑制劑如強心苷等，已經(jīng)被證實對多種腫瘤包括前列腺癌有抑制作用，并且有些抑制劑已經(jīng)進入臨床試驗。
　　課題組前期發(fā)現(xiàn)NKAIN2在前列腺癌中發(fā)揮抑癌作用，而作為鈉鉀泵相互作用因子，推測其可能通過抑制鈉鉀泵發(fā)揮抑癌作用，并且在細胞水平上進行探索和驗證。
　　方法：
　　基于以上認識，本研究首先通過west

4、ern blotting及鈉鉀泵活性試劑盒檢測前列腺癌細胞系中鈉鉀泵α1和β1亞基的表達及鈉鉀泵活性，并通過免疫組化在前列腺癌組織標本中檢測鈉鉀泵α1和β1亞基的表達;運用免疫共沉淀驗證了NKAIN2與鈉鉀泵β1亞基的相互作用;運用CRISPR/CAS9基因敲除技術，構(gòu)建Cas9/SgRNA質(zhì)粒慢病毒載體轉(zhuǎn)染22RV1細胞系(NKAIN2高表達)，并通過Western blotting和Cruiser酶切敲除及突變檢測試劑盒檢測敲除效率

5、;進一步通過裸鼠成瘤實驗在體內(nèi)驗證NKAIN2的抑癌作用，同時通過Western blotting檢測敲除NKAIN2后PI3K/Akt通路激活情況;接著在過表達、沉默NKAIN2的前列腺癌細胞系22RV1、PC-3中通過Western blotting及無機磷試劑盒檢測鈉鉀泵β1亞基的表達及鈉鉀泵活性，分析NKAIN2對鈉鉀泵的影響;并在前列腺癌細胞系22RV1、PC-3中沉默鈉鉀泵β1亞基，分析鈉鉀泵對前列腺癌生物學功能的影響。

6、r>　　結(jié)果：
　　1.本研究通過western blotting檢測發(fā)現(xiàn)前列腺癌細胞系中鈉鉀泵α1和β1亞基的表達較前列腺永生化上皮細胞系增高;并通過免疫組化檢測了30對前列腺癌標本，發(fā)現(xiàn)鈉鉀泵α1和β1亞基在前列腺癌組織中較癌旁組織表達增高;鈉鉀泵活性檢測試劑盒同樣發(fā)現(xiàn)前列腺癌細胞系鈉鉀泵活性較前列腺永生化上皮細胞系增強。
　　2.Western blotting和Cruiser酶檢測結(jié)果鑒定22RV1NKAIN2敲除細

7、胞株構(gòu)建成功，進一步裸鼠成瘤實驗提示NKAIN2敲除細胞系成瘤體積明顯較對照組增大，并且發(fā)現(xiàn)敲除NKAIN2后激活PI3K/Akt通路。
　　3.在PC-3及22RV1細胞中，過表達NKAIN2能抑制鈉鉀泵β1亞基的表達，相反沉默NKAIN2能增強鈉鉀泵β1亞基的表達。
　　4.在PC-3及22RV1細胞中，過表達NKAIN2能抑制鈉鉀泵活性，相反沉默NKAIN2能增強鈉鉀泵的活性。
　　5.在PC-3及22RV1細胞