1、研究依據(jù)：
　　子宮內(nèi)膜癌(endometrial carcinoma，EC)是在女性生殖系統(tǒng)發(fā)生的惡性腫瘤，盡管早期子宮內(nèi)膜癌患者的預后相對理想，但是超過30％的患者在發(fā)現(xiàn)時已處于腫瘤晚期，并且部分患者伴隨局部、盆腔甚至遠端轉(zhuǎn)移，因此預后不良。腫瘤轉(zhuǎn)移是造成患者死亡的主要原因，因此探索子宮內(nèi)膜癌的侵襲、轉(zhuǎn)移機制，進一步闡明腫瘤的發(fā)展過程顯得尤為迫切。近年來，多種生物標記物已被證實與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)展有關(guān)，但EFEMP2在子宮內(nèi)膜癌

2、細胞侵襲轉(zhuǎn)移過程中的作用尚未見報道。
　　EFEMP2(EGF containing fibulin-like extracellular matrix protein2)是一種細胞外基質(zhì)蛋白，主要參與彈性纖維的合成與排列。EFEMP2與皮膚松弛癥、主動脈夾層、骨關(guān)節(jié)炎、惡性腫瘤等多種疾病有關(guān)。為了探索EFEMP2在子宮內(nèi)膜癌增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移中的作用，本研究首次探討EFEMP2在子宮內(nèi)膜癌組織及細胞系中的表達情況及相關(guān)機制。

3、>　　研究目的：
　　1.探究EFEMP2在子宮內(nèi)膜癌組織、細胞中的表達及其意義。
　　2.探究慢病毒轉(zhuǎn)染后不同侵襲能力子宮內(nèi)膜癌細胞的功能轉(zhuǎn)變。
　　3.探究EFEMP2對子宮內(nèi)膜癌細胞侵襲轉(zhuǎn)移的作用機制。
　　研究方法：
　　1.免疫組化(IHC)探究EFEMP2在正常子宮內(nèi)膜組織及子宮內(nèi)膜癌組織中的表達情況;
　　2.單細胞克隆技術(shù)，從KLE、 ISK中分離出具有高侵襲能力的克隆細胞亞系KLE-

4、1、ISK-1和低侵襲能力的克隆細胞亞系KLE-28、ISK-23;
　　3.逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(RT-qPCR)、免疫印跡(Western blot)、免疫細胞化學(ICC)檢測EFEMP2在正常子宮內(nèi)膜、子宮內(nèi)膜癌細胞系(KLE、ISK、HEC-1A、HEC-1B)以及克隆細胞亞系中的表達情況;
　　4.生長曲線、軟瓊脂克隆形成實驗檢測子宮內(nèi)膜癌細胞系(KLE、ISK、HEC-1A、HEC-1B)以及克隆細胞亞系的增殖

5、能力;
　　5.Transwell侵襲轉(zhuǎn)移實驗檢測子宮內(nèi)膜癌細胞系(KLE、 ISK、 HEC-1A、HEC-1B)以及克隆細胞亞系的侵襲轉(zhuǎn)移能力;
　　6.慢病毒介導EFEMP2在高侵襲克隆細胞亞系過表達及RNA干擾沉默EFEMP2在低侵襲克隆細胞亞系表達，并驗證轉(zhuǎn)染效率;
　　7.建立裸鼠移植瘤模型，體內(nèi)模擬子宮內(nèi)膜癌發(fā)展過程，進一步探究EFEMP2在子宮內(nèi)膜癌細胞增殖、侵襲、轉(zhuǎn)移過程中的作用;
　　8.We

6、stern blot、RT-qPCR檢測EFEMP2與子宮內(nèi)膜癌細胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)之間的關(guān)系。
　　研究結(jié)果：
　　1.EFEMP2在正常子宮內(nèi)膜組織中陽性表達率高，在子宮內(nèi)膜癌組織中陽性表達率低(P＜0.05); EFEMP2的表達情況與子宮內(nèi)膜癌組織分化、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、以及不良預后密切相關(guān)(P＜0.05）;
　　2.EFEMP2在正常子宮內(nèi)膜細胞中高表達，在子宮內(nèi)膜癌細胞中低表達;在高侵襲克隆細胞亞系中低表達

7、，在低侵襲克隆細胞亞系高表達(P＜0.05);
　　3.慢病毒介導EFEMP2過表達后高侵襲克隆細胞增殖能力、侵襲和轉(zhuǎn)移能力減弱;RNA干擾沉默EFEMP2表達后低侵襲克隆細胞增殖能力、侵襲和轉(zhuǎn)移能力增強(P＜0.05);
　　4.裸鼠移植瘤模型:高侵襲克隆細胞亞系組腫瘤生長速度快，體積大，低侵襲克隆細胞亞系組腫瘤生長速度慢，體積小;EFEMP2過表達組成瘤率較低，瘤體體積小，肺轉(zhuǎn)移率低，EFEMP2干擾組成瘤率高，瘤體體積

8、大，肺轉(zhuǎn)移率高（P＜0.05）;
　　5.EFEMP2過表達組E-cadherin表達升高，N-cadherin、Vimentin、Snail、Slug、Twist的表達降低，抑制EMT; EFEMP2干擾組，E-cadherin表達降低，Vimentin、Snail、Slug、Twist的表達升高，促進EMT(P＜0.05)。
　　研究結(jié)論：
　　1.EFEMP2是子宮內(nèi)膜癌的一個抑癌因子，能夠抑制子宮內(nèi)膜癌細胞侵襲