1、研究背景及目的:
　　子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis，EMs)是一種常見(jiàn)的婦科良性疾病，其發(fā)病率約占生育年齡女性的10％，治療方式主要包括腹腔鏡及促性腺激素釋放激素類(lèi)似物(GnRHa)、芳香化酶抑制劑及孕酮等藥物治療，但術(shù)后仍有較高的復(fù)發(fā)率，長(zhǎng)期使用藥物會(huì)引起許多副反應(yīng)。而且，EMs與惡性腫瘤及許多慢性病的發(fā)生有關(guān)，因此尋找一有效的治療靶點(diǎn)至關(guān)重要。目前，EMs的發(fā)病機(jī)制尚不明確，但Sampson的經(jīng)血逆流學(xué)說(shuō)仍占主導(dǎo)

2、地位，近年郎景和院士提出的在位內(nèi)膜決定論為EMs的發(fā)病機(jī)理做出了補(bǔ)充說(shuō)明，即子宮內(nèi)膜碎片的異位粘附、侵襲及血管形成。骨膜素(periostin，PN)是成束蛋白I家族的成員，在成體組織中低表達(dá)，但在腫瘤、損傷及炎癥中起到至關(guān)重要的作用，高水平的PN可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞粘附、侵襲、遷移及增殖。我們前期研究已表明PN在EMs的在位及異位內(nèi)膜間質(zhì)中高度表達(dá)，而在EMs病理生理過(guò)程中所起的作用尚未研究。本文通過(guò)檢測(cè)PN對(duì)子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞(ESCs)

3、粘附、遷移、侵襲及增殖能力的影響，進(jìn)一步探索PN在EMs發(fā)生過(guò)程中的機(jī)制。
　　方法:
　　1.收集25例正常女性的子宮內(nèi)膜，32例EMs患者的在位內(nèi)膜及異位內(nèi)膜，分離并純化子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞，通過(guò)細(xì)胞免疫熒光法鑒定其來(lái)源及純度。
　　2.用Western blot的方法分別檢測(cè)正常子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞(NSCs)、子宮內(nèi)膜異位癥在位(EuSCs)及異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞(EcSCs)中PN、整合素連接激酶1（integrin-l

4、inked kinase1，ILK1）、p-Akt的表達(dá)，比較三種蛋白的表達(dá)差異;通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR(qPCR)檢測(cè)，分析三組細(xì)胞中PN mRNA的表達(dá)情況。
　　3.PN siRNA干擾后分別檢測(cè)PN、ILK1、p-Akt蛋白水平的變化。
　　4.PN siRNA干擾后檢測(cè)細(xì)胞粘附、遷移、侵襲及增殖等生物學(xué)行為的改變。
　　結(jié)果:
　　1.ESCs的鑒定及其純度:采用膠原酶消化、篩網(wǎng)過(guò)濾法，成功地分離并純化ES

5、Cs，經(jīng)鑒定所培養(yǎng)的細(xì)胞絕大部分為間質(zhì)細(xì)胞，其純度是（96.1±2.2）％。
　　2.PN、ILK1及p-Akt在NSCs、EuSCs、EcSCs中的表達(dá)情況:與NSCs相比，EuSCs及EcSCs中PN蛋白及mRNA的表達(dá)水平上調(diào)，但NSCs與EuSCs中PN mRNA表達(dá)無(wú)差異;在EuSCs及EcSCs中，ILK1和p-Akt的表達(dá)增加(P＜0.05)。
　　3.PN對(duì)ILK1及p-Akt表達(dá)水平的影響:PN siRNA

6、干擾后，PN、 ILK1、p-Akt的表達(dá)均下調(diào)（P＜0.05）。
　　4.PN對(duì)ESCs遷移、侵襲、粘附及增殖的影響:EuSCs及EcSCs的遷移及侵襲能力較NSCs增強(qiáng)(P＜0.01;P＜0.001)，PN siRNA干擾后，EcSCs的遷移及侵襲能力下降（P＜0.05;P＜0.01）;EcSCs的粘附速率最快(P＜0.05)，PNsiRNA干擾的EcSCs與纖維連接蛋白(FN)相互作用60mins后，粘附能力下降明顯(P＜0

7、.05)，EcSCs之間纖維連接增多，PN siRNA干擾后，細(xì)胞之間纖維樣物質(zhì)溶解;EuSCs與EcSCs的增殖能力較強(qiáng)，但是差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，PN siRNA轉(zhuǎn)染后，EcSCs增殖能力無(wú)明顯變化。
　　結(jié)論:
　　1.膠原酶消化、篩網(wǎng)過(guò)濾法分離培養(yǎng)的ESCs純度較高，NSCs、EuSCs及EcSCs的來(lái)源均為子宮內(nèi)膜間質(zhì)。
　　2.PN通過(guò)激活I(lǐng)LK1/Akt信號(hào)通路促進(jìn)ESCs遷移、侵襲及粘附，P