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![乙酰膽堿酯酶(AChE)缺失對年齡相關性黃斑變性疾病(AMD)的保護作用.pdf_第1頁](https://static.zsdocx.com/FlexPaper/FileRoot/2019-3/10/8/7b7a3bf3-206d-423c-b072-3eaaf2822ccc/7b7a3bf3-206d-423c-b072-3eaaf2822ccc1.gif)
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文檔簡介
1、目的:探討乙酰膽堿酯酶缺失對年齡相關性黃斑變性疾病的細胞凋亡的保護作用及機制。
方法:培養(yǎng)人視網膜色素上皮細胞株(ARPE19)至對數(shù)生長期,加入碘酸鈉濃度梯度:0.1mM,1mM,10mM。培養(yǎng)24h后,進行乙酰膽堿酯酶(AchE)免疫熒光檢測及MTT法進行細胞活力檢測,找出最佳濃度。然后體外實驗,沉默人視網膜上皮細胞株(ARPE19)的AChE基因及預處理乙酰膽堿酯酶抑制劑(AchEI)多奈哌齊兩種方法;體外實驗采用ACh
2、E-/+和AChE+/+老鼠經尾靜脈注射25mg/kg碘酸鈉,之后進行AChE、Cleaved Caspase-3的免疫熒光、TUNEL法檢測凋亡數(shù)量、Cell ROS及提取各實驗組的蛋白后用蛋白印跡法檢測各實驗組AChE、Cleaved Caspase-3和NOX2表達量。
結果:MTT值,碘酸鈉組的細胞活力明顯低于對照組,且具濃度依賴性。碘酸鈉組的乙酰膽堿酯酶(AChE)表達量也明顯高于對照組,且具有濃度梯度性,差異具有統(tǒng)
3、計學意義(P<0.01)。TUNEL法細胞凋亡數(shù)明顯少于對照組,且差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。蛋白印跡和免疫熒光檢測得出在體外體內缺失AChE后,NOX2表達量也相應少于對照組,Cell ROS實驗也證明其ROS含量也相應少于對照組,差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),說明其氧化應激反應被抑制。
結論:碘酸鈉誘導 ARPE19細胞凋亡過程中,乙酰膽堿酯酶表達量增高,且具有濃度梯度性。缺失 AChE后,其凋亡細胞數(shù)量減少
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