1、酚氧化酶(phenoloxidase，PO)(EC1.14.18.1)是一種廣泛存在于動物、植物、昆蟲、微生物及人體內(nèi)的一種結(jié)構(gòu)復(fù)雜的多亞基的含銅氧化還原酶，在昆蟲生理發(fā)育和內(nèi)源性免疫過程中具有重要作用，如昆蟲黑化、傷口愈合等。本課題組在前期研究中得到了編碼小菜蛾(Plutella xylostella L.)酚氧化酶原PxPPO1基因的mRNA，并研究了它在小菜蛾蟲體中的時空表達(dá)情況。本文在此基礎(chǔ)上通過染色體步移法，克隆得到了編碼小菜

2、蛾酚氧化酶原的PxPPO1全基因，通過對PxPPO1基因的序列進(jìn)行分析，得到PxPPO1基因的內(nèi)含子和外顯子及其所在位置，計算了內(nèi)含子AT％含量、接頭、堿基大小等信息，這為深入研究該基因的結(jié)構(gòu)與功能奠定了基礎(chǔ)。本研究的主要內(nèi)容如下:
　　1.通過對GenBank中搜索到的鱗翅目PPO1基因序列進(jìn)行比較，選取最保守序列設(shè)計引物，以基因組DNA為模板進(jìn)行PCR擴增，得到一段包含內(nèi)含子在內(nèi)的基因序列。以得到的基因序列作為染色體步移法的引

3、物模板，設(shè)計5'端上游3條嵌套式特異性引物，進(jìn)行5'側(cè)翼端擴增。通過多次步移，將所得序列拼接后得到小菜蛾P(guān)xPPO1基因全序列，共計7202bp。
　　2.通過在線分析軟件EMBOSS Needle和NCBI BLAST程序?qū)xPPO1基因序列分析，分析得出該序列含有12個外顯子和11個內(nèi)含子，其中4745bp的堿基為內(nèi)含子序列，5'端有一個407bp非編碼區(qū)，內(nèi)含子中A+T堿基構(gòu)成為60.9％，G+C堿基組成為39.1％。

4、r>　　3.選取內(nèi)含子I3和I9，運用DNAMAN軟件預(yù)測內(nèi)含子二級結(jié)構(gòu)、5'端剪接位點、3'端剪接位點和分枝位點，預(yù)測結(jié)果顯示I3和I9兩個內(nèi)含子均符合真核細(xì)胞mRNA的剪接規(guī)律。將所有內(nèi)含子與外顯子的接頭堿基序列找出并進(jìn)行比較，第8個內(nèi)含子3'端為AC，其余接頭堿基序列均為GT-AG，符合真核生物基因中GT-AG剪接規(guī)律。
　　4.運用在線軟件EMBOSS CpGplot預(yù)測內(nèi)含子中CpG島的分布，結(jié)果顯示在內(nèi)含子中未發(fā)現(xiàn)Cp