1、目的：研究肝癌細胞系對TRAIL耐藥的機制，探究 ISG15及miR-138在TRAIL耐藥機制中的作用，進一步提高TRAIL對腫瘤細胞的殺傷作用。
　　方法：首先選取四種肝癌細胞系LH86、SMMC-7721、HLC-Z01、Huh7細胞，以不同濃度TRAIL（1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml、20ng/ml）處理四種的肝癌細胞系（4h、6h、8h、12h）， MTT實驗檢測細胞活力，篩選出對TRAIL敏感的肝癌細胞系

2、及對TRAIL耐藥的肝癌細胞系。通過定量PCR及western blot實驗檢測ISG15及miR-138在TRAIL敏感細胞及與TRAIL耐藥細胞中的表達差異。利用真核載體構建及細胞轉染技術在TRAIL敏感細胞中沉默ISG15且在TRAIL耐藥細胞中過表達ISG15，通過western blot實驗分析其對TRAIL誘導細胞凋亡的影響。通過TargetScan預測分析，ISG15可能是miR-138的靶基因。利用細胞轉染技術在TRAI

3、L敏感細胞及耐藥細胞中過表達miR-138，通過定量PCR及western blot實驗檢測過表達miR-138對ISG15表達的影響，并通過western blot實驗分析其對TRAIL誘導細胞凋亡的影響。
　　結果：1.TRAIL有肝癌細胞凋亡的作用，LH86、SMMC-7721細胞對TRAIL敏感，Huh7、HLC-Z01細胞對TRAIL耐藥。當TRAIL濃度為10ng/ml，處理時間為8h時效果最佳。2.在TRAIL敏感細

4、胞中ISG15的表達水平較TRAIL耐藥細胞低，而TRAIL敏感細胞miR-138 的本底表達水平較耐藥細胞高。3.在敏感細胞中過表達 ISG15能抑制TRAIL誘導細胞凋亡的作用，相反，在耐藥細胞中沉默ISG15能增強TRAIL誘導細胞凋亡的作用，提示ISG15在TRAIL誘導細胞凋亡的過程中起調控作用，能抑制細胞凋亡。4.在敏感細胞及耐藥細胞中過表達miR-138能夠抑制ISG15的表達，表明ISG15為miR-138的靶

5、基因。5.在敏感細胞及耐藥細胞中過表達miR-138能夠增強TRAIL誘導細胞凋亡的作用。表明miR-138能調節(jié)TRAIL誘導細胞凋亡的作用。6.當同時過表達ISG15及miR-138時，TRAIL誘導細胞凋亡的效果較本底水平降低。表明miR-138是通過調控ISG15的表達增強TRAIL誘導細胞凋亡的作用。
　　結論：1.ISG15在TRAIL誘導肝癌細胞凋亡過程中起重要的調控作用。2.miR-138通過調節(jié)ISG15的表達增