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文檔簡介
1、視網(wǎng)膜色素上皮細胞(Retinal pigmented epithelium, RPE)的功能紊亂、變性和凋亡可造成視網(wǎng)膜內(nèi)環(huán)境的惡化,進而引起光感細胞的凋亡,最終導(dǎo)致退行性視網(wǎng)膜疾病的發(fā)生,使患者視力下降,甚至失明。但迄今為止,依然沒有有效的治療手段來治愈這些疾病。而近期臨床試驗表明,細胞治療有望成為該類退行性視網(wǎng)膜疾病的治療方法。其中,人胚胎干細胞(Human embryonic stem cell, hESCs)是一類能無限增殖和
2、分化成所有三胚層細胞的細胞群體,而hESCs誘導(dǎo)分化獲得的RPE(hESCs-RPE)被認為是細胞移植治療的最佳種子細胞。并且動物模型實驗和臨床試驗結(jié)果顯示,hESCs-RPE在體內(nèi)具有很好的安全性,不存在致瘤和引起其它不良反應(yīng)的風(fēng)險,并且對視力的恢復(fù)具有一定的效果。但是,現(xiàn)有的hESCs-RPE培養(yǎng)體系,往往使用滋養(yǎng)層(feeder)和含有胎牛血清(Fetal calf serum, FBS)等動物源性或成分不明確成份。為hESCs-
3、RPE的臨床應(yīng)用帶來了污染的潛在風(fēng)險和高昂的培養(yǎng)成本。而建立無動物源性培養(yǎng)體系,將有利于人們對RPE生長機制的研究和今后對hESCs-RPE相關(guān)細胞制劑的規(guī)模化、商品化生產(chǎn)。
本文通過無滋養(yǎng)層feeder、無血清體系培養(yǎng)的hESCs。并利用免疫熒光染色,核型分析,流式細胞儀等技術(shù)手段檢測 hESCs的形態(tài)與多能性表達情況。hESCs經(jīng)過7天的培養(yǎng)后,克隆塊基本融合。此時,將原有的hESCs培養(yǎng)液更換為RPE分化培養(yǎng)液,利用自分
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