1、胃癌是全球最常見的惡性腫瘤之一，其發(fā)病率位居第四，腫瘤相關死亡率位居第二。腫瘤血管形成促進腫瘤生長和轉移，VEGF/VEGFR信號通路在腫瘤血管生成中起主導作用。因此抗腫瘤血管生成治療多以VEGF/VEGFR為靶點。Apatinib作為VEGFR抑制劑，晚期胃癌患者接受apatinib治療使生存獲益，但是缺乏能夠預測apatinib獲益人群的生物標志物。腫瘤相關成纖維細胞（cancer-associated fibroblasts，CA

2、Fs）分泌多種細胞因子促進腫瘤血管生成。Galectin-1在腫瘤細胞和CAFs中均可表達。近年來，多項研究報道galectin-1通過多種途徑促進腫瘤血管生成。然而，galectin-1在CAFs中表達與胃癌apatinib敏感性的關系，目前尚無報道。
　　第一部分：
　　目的：腫瘤進展是腫瘤細胞和CAFs相互促進的結果，腫瘤細胞分泌的細胞因子如TGF-β等，誘導正常成纖維細胞（normal fibroblasts，NFs

3、）向CAFs轉化，而CAFs活化后促進腫瘤進展。Galectin-1在腫瘤細胞和CAFs均可表達。目前galectin-1/TGF-β信號軸在腫瘤細胞與CAFs相互促進過程中所起的中介作用尚不清楚，因此我們將對galectin-1/TGF-β在腫瘤細胞與CAFs間所起的聯(lián)系進行探索。
　　方法：分離原代胃癌CAFs和NFs，并應用免疫熒光和western blotting進行鑒定。應用real-time PCR和western b

4、lotting比較CAFs和NFs中galectin-1的表達水平。利用galectin-1過表達的慢病毒載體感染NFs上調(diào)galectin-1表達(NFs-Gal1)，Smallinterfering RNA(siRNA)轉染CAFs沉默galectin-1表達(CAFs-siGal1)。通過腫瘤細胞上清液誘導NFs向CAFs轉化的模型，探索galectin-1/TGF-β信號軸在腫瘤細胞與CAFs相互作用中的聯(lián)系。免疫組織化學法檢測

5、胃癌組織中galectin-1、TGF-β的表達情況，明確galectin-1與TGF-β的關聯(lián)。Kaplan-Meier曲線描述胃癌患者的生存期，并采用Log-rank檢驗對臨床資料和數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。Cox regression風險回歸模型對胃癌預后的各臨床參數(shù)進行多因素分析。
　　結果：Galectin-1在CAFs中高表達，并且促進NFs向CAFs轉化。腫瘤細胞分泌TGF-β誘導NFs表達galectin-1，galect

6、in-1正向調(diào)節(jié)TGF-β誘發(fā)的NFs向CAFs轉化。Galectin-1表達與TGF-β表達呈正相關（r=0.765，P＜0.001）。Galectin-1表達水平與腫瘤分化程度、淋巴轉移、浸潤深度和腫瘤TNM分期有關。Galectin-1高表達的胃癌患者總生存期短，并且是獨立的預后因素。
　　結論：Galectin-1促進TGF-β所誘導的NFs向CAFs轉化的過程，并且其表達水平與胃癌患者的預后呈負相關。
　　第二部分

7、：
　　目的：第一部分實驗結果表明CAFs中galectin-1表達升高，并且galectin-1表達水平與胃癌患者預后呈負相關。我們將通過一系列的體外體內(nèi)功能學實驗探索galectin-1促進腫瘤進展的機制。
　　方法：通過不同Galectin-1表達水平的成纖維細胞條件培養(yǎng)基(CMs)培養(yǎng)胃癌細胞，采用流式細胞儀(flow cytometry，F(xiàn)C)檢測腫瘤細胞凋亡， transwell實驗檢測腫瘤細胞侵襲和遷移。Wes

8、tern blotting等實驗方法對作用機制進行探討。建立裸鼠皮下荷瘤模型，明確成纖維細胞galectin-1表達水平對腫瘤生長的影響。
　　結果：CAFs明顯抑制腫瘤細胞凋亡，促進侵襲和遷移(P＜0.05)。沉默CAFs中galectin-1表達，抗腫瘤細胞凋亡及促侵襲的作用被逆轉。CAFs促進腫瘤細胞中Bcl-2和MMP9表達，抑制Bax表達。裸鼠荷瘤實驗結果顯示，galectin-1高表達的成纖維細胞明顯促進腫瘤生長。

9、r>　　結論：Galectin-1高表達的CAFs通過調(diào)節(jié)凋亡相關蛋白和MMP9的表達水平，分別影響腫瘤細胞凋亡、侵襲和轉移的過程。
　　第三部分：
　　目的：Apatinib靶向VEGFR，使晚期胃癌患者的生存顯著獲益，但是缺乏能夠預測apatinib療效的生物標志物。Galectin-1在腫瘤血管生成中起重要作用，因此，我們將明確galectin-1表達水平與胃癌apatinib敏感性的關系。
　　方法：通過CCK

10、-8及體外HUVEC小管形成實驗，探索CAFs中galectin-1的表達水平與apatinib敏感性的關系。NFs-Gal1、NFs-Ctr分別與腫瘤細胞共同接種，建立裸鼠皮下荷瘤模型，從體內(nèi)水平評價apatinib的療效。
　　結果：Galectin-1促進CAFs表達bFGF，使apatinib抑制HUVEC增殖及小管形成的作用受限。上調(diào)NFs中galectin-1表達能夠抑制apatinib抗腫瘤生長及抗血管生成的作用。<