1、目的:
　　觀察三物白散對(duì)體外經(jīng)TGF-β1誘導(dǎo)后A549細(xì)胞的增殖抑制作用、不同時(shí)間點(diǎn)三物白散對(duì)其細(xì)胞上清液分泌的IFN-r、IL-4、VEGF水平的影響以及a-SMA、E-cad、MAPK家族P38MAPK和P-P38MAPK蛋白表達(dá)的影響，探討在三物白散干預(yù)下可能對(duì)TGFβ1-EMT進(jìn)程中的作用機(jī)制，從而研究三物白散與肺間質(zhì)纖維化(PF)的關(guān)系，為PF的中醫(yī)臨床治療提供新的思路和切入點(diǎn)。
　　方法:
　　對(duì)無(wú)血清

2、培養(yǎng)基饑餓過(guò)夜后、生長(zhǎng)狀態(tài)良好的A549細(xì)胞隨機(jī)分為7組:取1組作為空白組加入6ml完全培養(yǎng)液，1組加入TGF-β1至完全培養(yǎng)液中(TGF-β1終濃度為5ng/ml)作為模型組，其余5組藥物組分別為SWB極低、低、中、高劑量組(SWB藥液終分別為10-6、10-5、10-4、10-3g/ml)和西藥組。
　　①采用MTT法檢測(cè)不同濃度的三物白散對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的A549細(xì)胞在24、48、72h時(shí)的增殖抑制作用，選取合適藥物濃度、

3、藥物作用時(shí)間。
　　②借助顯微鏡觀察24、48h時(shí)各組A549細(xì)胞形態(tài)的改變。
　?、鄄捎肊LISA法于24、48h兩個(gè)時(shí)間點(diǎn)，檢測(cè)各組細(xì)胞上清液中VEGF、IL-4、IFN-r的分泌表達(dá)水平。
　　④選用weaern-blot法檢測(cè)24h、48h時(shí)各組E-cad、a-SMA、P38MAPK和P-P38MAPK的蛋白表達(dá)情況。
　　結(jié)果:
　　三物白散對(duì)體外經(jīng)TGF-β1誘導(dǎo)后A549細(xì)胞的增殖抑制作用:2

4、4h時(shí)，三物白散的高、中劑量組對(duì)經(jīng)TGF-β1誘導(dǎo)的A549細(xì)胞有抑制作用，且藥物對(duì)細(xì)胞的抑制率與藥物濃度呈正比的關(guān)系，高劑量組的抑制率為23.68％;48h時(shí)，三物白散設(shè)定的四個(gè)濃度對(duì)細(xì)胞的抑制率相較于模型組都有明顯的抑制作用，呈拋物線趨勢(shì)，其中，中劑量組的抑制率最高達(dá)到了33.4％;72h時(shí)三物白散各藥物濃度對(duì)細(xì)胞的抑制率與48h時(shí)藥物抑制趨勢(shì)一致但均低于48h的各對(duì)應(yīng)組。
　　顯微鏡下觀察A549在TGF-β1的作用下，細(xì)胞

5、形態(tài)由原先鵝卵石狀向條梭放射狀轉(zhuǎn)變，并在48h時(shí)相對(duì)于24h時(shí)A549細(xì)胞的條梭狀改變更為明顯。
　　ELISA結(jié)果顯示:VEGF、IL-4在模型組細(xì)胞上清液中的表達(dá)較相應(yīng)的空白組均顯著上升，IFN-r的表達(dá)明顯下降;藥物組VEGF、IL-4在細(xì)胞上清液中含量與相應(yīng)模型組相比，皆有不同程度的下調(diào)，藥物組IFN-r在細(xì)胞上清中的表達(dá)量與其同時(shí)間點(diǎn)模型組的含量相比，顯著增高，其差別具有統(tǒng)計(jì)性意義。其中高、中劑量組的藥效作用要略優(yōu)于低劑

6、量組，但高、中劑量組的組間差異不明顯。
　　western-blot法檢測(cè)結(jié)果顯示:A549經(jīng)TGF-β1刺激24h、48h后（與空白組相比），a-SMA、P-P38MAPK表達(dá)明顯增加;E-cad表達(dá)下調(diào);P38MAPK蛋白表達(dá)變化不明顯。經(jīng)三物白散干預(yù)之后與相應(yīng)模型組相比，藥物組a-SMA、P-P38MAPK的表達(dá)量均有程度不同的下調(diào)，E-cad蛋白相應(yīng)表達(dá)增加，其差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;藥物組P38MAPK蛋白表達(dá)較模型組有一定

7、下調(diào)趨勢(shì)，但僅在24h高劑量組，48h中劑量組蛋白下調(diào)量有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)論:
　　①TGF-β1可誘導(dǎo)A549細(xì)胞向間充質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化。
　?、?8小時(shí)時(shí)，中劑量組三物白散對(duì)經(jīng)TGF-β1誘導(dǎo)下A549細(xì)胞的增殖抑制率最明顯。
　　③三物白散可能通過(guò)調(diào)節(jié)經(jīng)TGF-β1誘導(dǎo)的A549細(xì)胞EMT體外模型中細(xì)胞因子IFN-r、IL-4、VEGF的濃度表達(dá)水平而起到抑制肺纖維化病情進(jìn)程的作用。
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