1、第一部分糖蛋白CD44基因多態(tài)性與肝癌遺傳易感性研究
　　目的：CD44是一種分布極其廣泛，具有高度異質性的單鏈跨膜糖蛋白粘附分子，在腫瘤細胞的增殖、分化、侵襲、浸潤以及轉移中發(fā)揮著重要的作用。本研究通過檢測CD44基因rs8193、rs10836347和 rs13347三個位點的基因型及等位基因頻率分布情況，探討CD44基因rs8193、rs10836347和rs13347三個位點的基因多態(tài)性與肝癌（HCC）患病風險的相關性。<

2、br>　　方法：本研究共納入204例肝癌患者和210例對照者，采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性技術及DNA直接測序法，檢測CD44基因rs8193、rs10836347和 rs13347三個位點的基因多態(tài)性。采用擬和優(yōu)度χ2檢驗分析各SNP位點在肝癌組和對照組中基因型頻率的分布是否符合哈-溫平衡（HWE）。采用Binary logstic回歸通過校正性別、年齡、吸煙和飲酒四個影響因素計算比值比（OR）和95％可信區(qū)間（CI），對基

3、因多態(tài)性和肝癌的患病風險進行關聯(lián)分析。
　　結果：
　　1. CD44基因三個SNP基因型頻率在肝癌組和對照組中的分布符合哈-溫平衡，P值均大于0.05，說明選擇的樣本具有群體代表性。
　　2.本研究發(fā)現(xiàn)rs8193位點共有CC、CT和TT三種基因型。以CC基因型為參考基因型，未發(fā)現(xiàn)CT和TT基因型與肝癌的患病風險有相關性。以C等位基因為參考基因，T基因型與肝癌的患病風險無相關性。無論是在顯性模型還是隱性模型分析時，均

4、未發(fā)現(xiàn)有基因型與肝癌的患病風險有相關性。
　　3.本研究發(fā)現(xiàn)rs10836347位點共有CC、CT兩種基因型。以CC基因型為參考基因，未發(fā)現(xiàn)CT基因型與肝癌的患病風險有相關性（P=0.253）。以C等位基因為參考基因，T基因型與肝癌的患病風險無相關性。
　　4.本研究發(fā)現(xiàn)rs13347位點共有CC、CT和TT三種基因型。以CC基因型為參考基因，攜帶CT基因型的個體可以增加肝癌的患病風險至1.626倍（95% CI：1.057

5、-2.500，P=0.027）。攜帶TT基因型的個體可以增加肝癌的患病風險至1.965倍（95% CI：1.043-3.702，P=0.037）。以C等位基因為參考基因，T基因型可以增加肝癌的患病風險至1.461倍（95%CI：1.091-1.956，P=0.011）。在顯性模型分析中，CT+TT與CC基因型相比，可以增加肝癌的患病風險至1.697倍（95% CI：1.130-2.549，P=0.011）。在分析隱性模型時，未發(fā)現(xiàn)其與肝

6、癌的患病風險有相關性（P=0.549）。
　　5.對性別、年齡、吸煙和飲酒等危險因素進行分層分析時發(fā)現(xiàn)，女性人群中，rs13347位點的CT基因型可以增加肝癌的患病風險至2.675倍（95%CI：1.004-7.132，P=0.049），TT基因型可以增加肝癌的患病風險至5.922倍（95%CI：1.083-33.164，P=0.040）；在年齡≥50歲組中，rs13347位點的CT基因型可以顯著增加肝癌的患病風險至2.157倍（

7、95%CI：1.113-4.181，P=0.023），TT基因型顯著增加肝癌的患病風險至3.405倍（95%CI：1.263-9.178，P=0.015）；在飲酒人群中，rs10836347位點的CT基因型顯著增加肝癌的患病風險至4.552倍(95%CI：1.205-17.192，P=0.025)，rs13347位點的CT基因型與肝癌的患病風險無相關性。TT基因型顯著增加肝癌的患病風險至4.549倍（95%CI：1.244-16.635

8、，P=0.022）。
　　6.在進行單倍型分析時發(fā)現(xiàn)，TTT單倍型顯著增加了肝癌的患病風險，表明TTT單倍型可能是肝癌的一個危險因素。
　　結論：CD44基因rs8193、rs10836347位點的基因多態(tài)性與肝癌的患病風險無相關性。Rs13347位點的T等位基因的基因突變可增加肝癌的患病風險。
　　第二部分肝癌血清糖蛋白聚糖譜的性別差異研究
　　目的：糖基化修飾是蛋白質翻譯后最常見的修飾之一。同一蛋白質由于糖鏈

9、結構的差異可能會導致功能的差異。男性肝癌的發(fā)病率明顯高于女性，而女性的預后生存率卻明顯高于男性。本部分研究通過凝集素芯片技術對男性和女性在肝癌發(fā)生過程中的血清糖蛋白譜進行檢測，旨在研究其糖蛋白糖譜特征性變化，篩選出男女肝癌差異性的糖譜標志，為男女肝癌發(fā)病差異研究提供新思路及實驗基礎。
　　方法：實驗主要包含以下步驟：（1）血清低豐度蛋白的收集：等體積混合4組（男性對照組、男性肝癌組、女性對照組和女性肝癌組）患者血清，使用高豐度蛋白

10、去除柱收集血清低豐度蛋白；（2）將收集的低豐度蛋白經除鹽、超濾、測定濃度后處理為待標記緩沖液；（3）待測低豐度蛋白CY5標記；（4）凝集素芯片的點制及芯片的雜交；（5）芯片掃描、數(shù)據(jù)提??；（6）數(shù)據(jù)統(tǒng)計采用SPSS13.0，符合正態(tài)分布且方差齊性的數(shù)據(jù)采用兩獨立樣本的均數(shù)t檢驗，方差不齊者采用非參數(shù)秩和檢驗。（7）凝集素印跡。
　　結果：在男性肝癌組和對照組中共篩選出12種差異的凝集素親和信號，它們是AAL、ConA、DSL、EC

11、L、LCA、MNA-G、MNA-M、PHA-E、PSA、SNA,EBL、SNA-I、WFA,WFL。提示在男性肝癌的發(fā)生過程中血清糖蛋白聚糖譜中末端核心巖藻糖、雙天線結構、α1,6連接的巖藻糖半乳糖胺、半乳糖、甘露糖殘基、平分型 GlcNAc等糖鏈結構增加，β-1,4半乳糖-N-乙酰葡糖胺和GalNAcα/β-1,3/6Gal結構減少。在女性肝癌組和對照組中共篩選出13種差異的凝集素親和信號，它們是AAL、CALSEPA、ConA、DS

12、L、LCA、LTL、MNA-M、PHA-E、RCA I,RCA120、SNA,EBL、SNA-I、WFA,WFL、WGA，提示在女性肝癌的發(fā)生過程中血清糖蛋白聚糖譜中末端核心巖藻糖、雙天線甘露糖結構、α1,6連接的巖藻糖半乳糖胺、平分型GlcNAc等糖鏈結構增加，高甘露糖、雙天線結構和GalNAcα/β-1,3/6Gal結構減少。在男性肝癌組和女性肝癌組中共篩選出7種差異的凝集素親和信號，提示男性肝癌患者血清中含有較多的雙天線、N-乙酰

13、基-D-半乳糖胺、半乳糖、甘露糖殘基、唾液酸等結構，而平分型結構和GalNAcα/β-1,3/6Gal結構較女性肝癌患者減少。
　　結論：不同性別肝癌患者血清蛋白糖譜存在差異，男性肝癌的高發(fā)病率及高病死率可能和糖鏈結構的改變有關。
　　第三部分血清DKK1糖蛋白對肝癌診斷價值的META分析
　　目的：系統(tǒng)評價血清DKK1對肝癌的診斷價值。
　　方法：計算機檢索外文數(shù)據(jù)庫：PubMed、EMBASE、Science

14、Direct、Elsevier、Springer、EBSCO、Cochran e library。中文數(shù)據(jù)庫：中國期刊網(wǎng)全文數(shù)據(jù)庫(CNKI)、萬方數(shù)據(jù)庫(WF)、中國生物醫(yī)學文獻數(shù)據(jù)庫（CMCC）和中文科技期刊全文數(shù)據(jù)庫(VIP)，檢索時間截止至2016年1月。按照已經制定好的的納入排除標準對檢索出來的文獻進行嚴格的篩選，提取所需要的納入文獻的基本資料信息。使用Meta-DiSc軟件進行統(tǒng)計分析，根據(jù)異質性特點選擇相應的效應模型進行計

15、算合并的敏感度、特異度、陽性似然比、陰性似然比和診斷比值比（DOR），繪制匯總受試者工作曲線（SROC），并計算曲線下面積（AUC）。
　　結果：共檢索到452篇相關文獻，最終納入11篇文獻，提供了13個DKK1診斷肝癌的研究結果。Meta分析數(shù)據(jù)顯示DKK1診斷肝癌的合并敏感度為72％，合并特異度為88％，DOR為25.95，AUC為0.872。其中的6篇文獻，提供8個DKK1聯(lián)合AFP診斷肝癌的研究結果，匯總DKK1聯(lián)合AFP