1、目的:肝癌在國(guó)內(nèi)屬于常見惡性腫瘤之一，目前肝癌的諸多治療方法中首選的治療方法是手術(shù)切除，但因?yàn)榧膊”旧硖攸c(diǎn)所致肝切除術(shù)后效果欠佳，復(fù)發(fā)率亦較高。同時(shí)，由于肝癌發(fā)病較為隱蔽，不易被發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)肝癌患者被發(fā)現(xiàn)時(shí)已經(jīng)到了中期甚至晚期，錯(cuò)過了適合手術(shù)切除的最佳時(shí)間。因此，在治療肝癌而進(jìn)行的肝切除術(shù)后，化療也是必不可少的治療手段。化療在預(yù)防肝癌復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移，以及延長(zhǎng)病人的生存時(shí)間、改善和提高生命質(zhì)量方面具有重要的意義。但是，化療效果往往很難達(dá)到理想

2、狀態(tài)，這與肝癌細(xì)胞的強(qiáng)耐藥性相關(guān)。在對(duì)腫瘤患者死亡原因的研究結(jié)果進(jìn)行分析時(shí)，大量臨床資料統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)顯示，其中90％以上的病例死亡與其化療時(shí)出現(xiàn)耐藥性密切相關(guān)。因此，深入研究肝癌細(xì)胞耐藥發(fā)生的分子機(jī)制以及涉及到的通路，可以明確肝癌細(xì)胞耐藥機(jī)制，并為尋找肝細(xì)胞癌新的、有效的治療靶點(diǎn)提供理論依據(jù)。
　　目前針對(duì)肝細(xì)胞癌的化療藥物多種多樣，如阿霉素，紫杉醇，5-Fu和順鉑等。這些都是肝癌化療的一線藥物，與此同時(shí)，也造成了多藥耐藥(MDR)的

3、發(fā)生。多藥耐藥基因ABCB1位于人類7號(hào)染色體長(zhǎng)臂2區(qū)1帶，屬于ABC(ATP-binding cassette)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白家族成員，其過度表達(dá)成為了腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物發(fā)生耐藥的主要原因，但肝癌細(xì)胞對(duì)阿霉素耐藥性的出現(xiàn)是否與ABCB1過表達(dá)有關(guān)，至今未見報(bào)道。因此，詳細(xì)研究ABCB1在肝癌細(xì)胞對(duì)阿霉素耐藥過程中的作用具有重要的臨床意義。
　　阿霉素(Doxorubicin)是一種抗腫瘤抗生素，對(duì)RNA和DNA的合成有顯著的抑制作用。

4、其藥理作用中，抑制作用最強(qiáng)的方面體現(xiàn)在對(duì)RNA的抑制作用方面。其優(yōu)點(diǎn)是抗瘤譜較廣泛，并且多種腫瘤的抑制作用都比較顯著。阿霉素屬于周期非特異性藥物，對(duì)各種生長(zhǎng)階段的腫瘤細(xì)胞都有殺滅作用。阿霉素是當(dāng)前公認(rèn)的肝癌切除術(shù)后重要的輔助治療手段，且其臨床療效已經(jīng)得到多方面的確認(rèn)。
　　為此，本研究探討阿霉素對(duì)人肝癌細(xì)胞株HepG2及其耐藥細(xì)胞株中ABCB1表達(dá)的影響，從而進(jìn)一步闡明ABCB1表達(dá)水平改變與肝癌細(xì)胞產(chǎn)生化療耐藥性的關(guān)系，為探索新

5、的肝癌治療方法、克服腫瘤耐藥性提供理論依據(jù)。
　　方法:本試驗(yàn)采用常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)方法來培養(yǎng)普通肝癌細(xì)胞HepG2，建立其對(duì)阿霉素的耐藥細(xì)胞株(HepG2/Doxorubicin)，并觀察耐藥細(xì)胞株與親本細(xì)胞形態(tài)學(xué)差異;采用MTT實(shí)驗(yàn)方法，觀察阿霉素對(duì)人肝癌細(xì)胞HepG2、以及其耐藥細(xì)胞株增殖周期的抑制作用;實(shí)驗(yàn)方法方面則采用RT-PCR和Western Blot相結(jié)合的實(shí)驗(yàn)方法，從mRNA水平和蛋白表達(dá)水平進(jìn)行研究，以期觀察人肝癌細(xì)

6、胞HepG2、以及耐藥細(xì)胞株HepG2/Doxorubicin中ABCB1變化情況。將實(shí)驗(yàn)測(cè)得的不同濃度阿霉素對(duì)耐藥細(xì)胞株HepG2/Doxorubicin抑制率變化與ABCB1 mRNA變化進(jìn)行相關(guān)分析，為推斷ABCB1與HepG2細(xì)胞耐藥性的關(guān)系提供依據(jù)。
　　結(jié)果:1.親本細(xì)胞呈梭形，排列比較密集，大小也比較均勻，貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞間邊界清晰;耐藥細(xì)胞株則表現(xiàn)為生長(zhǎng)緩慢，形狀變得不規(guī)則，體積略有增大，核皺縮，胞漿內(nèi)出現(xiàn)空泡，堆疊

7、生長(zhǎng)。
　　2.RT-PCR和Western Blot法檢測(cè)ABCB1在HepG2親本細(xì)胞和耐藥株中mRNA和蛋白表達(dá)水平，結(jié)果顯示耐藥株均明顯高于其親本細(xì)胞。
　　3.MTT法檢測(cè)親本細(xì)胞及其耐藥細(xì)胞株的耐藥性，耐藥細(xì)胞株在實(shí)驗(yàn)中不同濃度的阿霉素作用下，與親本細(xì)胞株相比，其生長(zhǎng)抑制率(Inhibition ratio)可觀察到明顯降低，呈現(xiàn)出一定程度上的耐藥性。
　　4.不同濃度阿霉素對(duì)耐藥細(xì)胞株HepG2/Doxo

8、rubicin抑制率與ABCB1mRNA水平呈負(fù)相關(guān)關(guān)系，即隨著ABCB1mRNA水平升高，阿霉素對(duì)HepG2/Doxorubicin的抑制作用下降，耐藥性增強(qiáng)。
　　結(jié)論:阿霉素可抑制人肝癌細(xì)胞株HepG2的生長(zhǎng)增殖。人肝癌細(xì)胞株HepG2對(duì)阿霉素產(chǎn)生耐藥后，細(xì)胞株中ABCB1表達(dá)水平明顯增高。隨著ABCB1 mRNA水平升高，耐藥性增強(qiáng)。為今后臨床化學(xué)藥物治療肝癌患者時(shí)考慮采用聯(lián)合療法提供一定的理論依據(jù)，為完善肝癌多藥耐藥機(jī)制