1、目的:肝癌具有高侵襲,轉移早,易復發(fā),預后差的臨床病理特征,是癌癥致死的第三大原因,而且還是肝硬化患者的首要致死原因。每年全球超過60萬人被診斷為肝癌,而我國又是全球肝癌發(fā)病率最高的國家,每年新發(fā)病例數占全球總數的55％,是目前對我國人民健康和生命威脅較大的惡性腫瘤之一。近年來的研究表明,肝癌細胞的生長、增殖、分化、凋亡、侵襲及轉移的過程受到多條細胞信號轉導通路的調控。因此,探討抗腫瘤藥物對肝癌細胞的作用機制,尋找新的預防和治療靶點以及

2、更有效的治療藥物,對降低肝癌發(fā)病率和死亡率,將有十分重要的意義。P38絲裂原活化蛋白激酶(p38 mitogen activated protein kinases,p38MAPK)信號通路與細胞外信號調節(jié)激酶1/2(extra cellular signalregulated protein kinase,ERK1/2)信號通路廣泛存在于細胞內,它們通過MAPKKK,MAPKK,MAPK3個核心蛋白激酶的級聯(lián)反應,以磷酸化的形式進行激

3、活,從而將細胞外的刺激信號通過細胞漿傳遞到細胞核內,并對細胞核內相應因子起調控作用。近年來研究表明p38MAPK信號轉導通路主要調控的與腫瘤有關的因子有VEGF[4]和MMPs[5],ERK1/2信號轉導通路主要調控的與腫瘤有關的因子有轉錄因子AP-1[6]。VEGF、MMPs、AP-1在許多腫瘤的侵襲、轉移過程中起著重要作用。因此,對p38MAPK與ERK1/2信號轉導通路的研究可能是一個腫瘤預防及治療的新靶點。
　　 羅格列

4、酮屬于噻唑啉二酮類藥物(Thiazolidinediones,TZDs),它可作用于過氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferator-activatedreceptor-γ,PPAR-γ),是PPAR-γ的激動劑。PPAR-γ是一類由配體激活的核轉錄因子,是核激素受體超家族中的成員,近年研究發(fā)現(xiàn)PPAR-γ激動劑羅格列酮可通過激活PPAR-γ受體發(fā)揮抑制腫瘤細胞生長,促進腫瘤細胞凋亡,抑制腫瘤血管生成,降低腫

5、瘤侵襲力等作用[7,8],但羅格列酮對調控腫瘤細胞生長、增殖、分化、凋亡、侵襲及轉移起重要作用的p38MAPK與ERK1/2信號轉導通路的研究至今未見報道。
　　 為此,本研究探討羅格列酮對人肝癌細胞株HepG2中p-p38MAPK及p-ERK1/2表達的影響,分析p38MAPK與ERK1/2信號轉導通路與肝癌細胞的生長、增殖、分化、凋亡、侵襲及轉移的關系,最終為p38MAPK與ERK1/2信號轉導通路成為肝癌臨床預防與治療的新

6、靶點提供理論依據。
　　 方法:
　　 常規(guī)培養(yǎng)人肝癌細胞株HepG2。采用MTT法檢測不同濃度的羅格列酮(0.1、1、10、100μmol/L)在24h、48h、72h三個時間點對HepG2細胞的增殖抑制作用;Western-Blot方法測定不同濃度的羅格列酮(1、20、100μmol/L)作用HepG2細胞15min及藥物濃度為10μmol/L的羅格列酮作用HepG2細胞不同時間(15、30、60、120min)后,

7、HepG2細胞中P-p38MAPK及P-ERK1/2表達的變化。
　　 結果:
　　 1：MTT法檢測各濃度組羅格列酮均可顯著抑制HepG2細胞的增殖,且呈時間和劑量依賴關系。
　　 2：Western-Blot方法檢測不同濃度的羅格列酮(1、10、100μmol/L)作用HepG2細胞15min后p-p38MAPK及p-ERK1/2在HepG2細胞中表達均明顯增加,但表達量在各濃度間無明顯變化;Western-

8、Blot方法檢測藥物濃度為10μmol/L的羅格列酮作用HepG2細胞不同時間(15、30、60、120min)后HepG2細胞中p-p38MAPK及p-ERK1/2的表達15min最強,其中15、30、60min呈依次減弱變化,60min與120min的表達無明顯變化。
　　 結論:
　　 羅格列酮可抑制人肝癌細胞株HepG2的增殖。羅格列酮可激活p38MAPK與ERK1/2信號轉導通路,使HepG2細胞中p-p38M