1、1、研究目的:為了探究miR-320在骨髓增生異常綜合征（MDS）中可能的作用機制，本研究擬以前期利用microRNA芯片技術在MDS患者中篩選出的特異性microRNA為基礎，篩選出具有顯著表達差異的miR-320進行其表達水平的檢測。由于miR-320a在腫瘤表達中更為常見，具有研究意義，利用生物信息學預測其直接靶基因，并進行GO分析及Pathway分析了解潛在的作用通路，為MDS患者的診斷和治療提供新的理論基礎。
　　2、研

2、究方法:在前期研究的microRNA芯片檢測結果中篩選出具有表達差異的miR-320等7個具有表達差異的基因。利用Real-time PCR檢測技術在10例MDS初治患者、5例初治MDS轉白患者及5例正常對照組中檢測篩選出的microRNA表達水平的驗證。挑選出具有明顯表達差異及統(tǒng)計學意義的microRNA進行擴大樣本量的Real-time PCR檢測，檢測樣本包括52例初治MDS患者標本（31例低危+中危1，21例中危2+高危）、16

3、例初治MDS轉白患者標本及19例正常對照者標本，并分析它們的表達量與MDS患者臨床病理特征的相關性。通過生物信息學技術預測具有差異表達的miR-320a在MDS中的直接靶基因，以及靶基因所富集的基因功能注釋和信號轉導通路。結合文獻報道篩選出差異表達的miR-320a在MDS中的潛在靶基因。
　　3、研究結果
　　⑴從前期研究的microRNA芯片檢測結果中篩選出包括miR-320a和miR-320d在內的7個具有表達差異的m

4、icroRNA。其中，miR-320a和miR-320d在MDS中的表達上調。利用Real-time PCR實驗在10例MDS患者、5例MDS轉白患者及5例正常對照組中檢測miR-320a和miR-320d的表達水平，結果顯示miR-320a和miR-320d的表達量在MDS各組中均高于在正常對照組，且在中危2+高危組和MDS轉白組中的表達量均比在低危+中危1組中的表達量高。
　?、评肦eal-time PCR實驗在52例MDS

5、患者、16例MDS轉白患者及19例正常對照者中檢測miR-320a/d的表達水平，結果顯示miR-320a/d在總的MDS樣本中miR-320a/d的表達量比正常對照組的表達量高，是正常對照組的3.18倍（P=1.35×10-6），并且在所有MDS亞組中的表達均比正常對照組的升高。miR-320a/d在低危+中危1組中的表達量是正常對照組的1.87倍，在中危2+高危組中的表達量是正常對照組的3.78倍，在MDS轉白組中的表達量是正常對照

6、組的4.74倍。
　?、菍DS患者的骨髓原始細胞比例與miR-320a/d在MDS中的表達量進行相關分析得出，MDS患者骨髓原始細胞比例與miR-320a/d在MDS中的表達量呈正相關。
　?、壤蒙镄畔W技術，預測miR-320a的潛在靶基因，得到81個交集靶基因，結合文獻報道預測miR-320a的靶基因為PCDH9。GO分析結果顯示，miR-320a主要富集于縮短核轉錄mRNA poly(A)尾、mRNA分解代謝過程

7、、蛋白結合作用、核孔復核體等基因功能注釋。Pathway分析結果顯示miR-320a主要富集于軸突導向生長、RNA降解、結直腸癌形成、病毒介導的癌癥形成、溶酶體通路等信號轉導通路。GO分析及Pathway分析結果表明miR-320a主要通過與mRNA相互作用參與了基因表達水平的調控，并在腫瘤的病理機制中起到重要的作用。
　　4、研究結論
　?、舖iR-320a/d在MDS患者中表達量明顯增高，且根據(jù)MDS危險度的增加，其表達