1、目的:
　　探討兒童系統(tǒng)性紅斑狼瘡(pediatric systemic lupus erythematosus，pSLE)患者基因組DNA甲基化水平在發(fā)病過(guò)程中的變化、LINE-1序列甲基化水平的變化及其與病情活動(dòng)度、補(bǔ)體C3及血漿同型半胱氨酸的相關(guān)性。
　　方法:
　　一、對(duì)象為2010-2012年在我院風(fēng)濕免疫科確診的pSLE患兒。選取pSLE患兒外周血單個(gè)核細(xì)胞的DNA標(biāo)本為病例組，同期采集健康查體兒童DNA標(biāo)

2、本為對(duì)照組。S LEDAI≥10分為疾病活動(dòng)組，＜10分為相對(duì)靜止組;按年齡分為＜12歲和≥12歲組。取100 ng DNA標(biāo)本，加入0.25 UBenzonase核酸酶，0.3 mU磷酸二酯酶Ⅰ和0.2 U堿磷酸酶，用Tris緩沖液控制pH值在7.9，37℃水解6小時(shí)。利用Agilent1200-6410B液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀和Agilent ZORBAX SB-AQ C18(2.1×50 mm，3.5μ)色譜柱對(duì)水解后樣品分離定量。

3、優(yōu)化方法在5 min內(nèi)完成一份樣品檢測(cè)，并行方法的日內(nèi)穩(wěn)定和日間穩(wěn)定性評(píng)價(jià)，證明方法穩(wěn)定可靠。實(shí)際樣品進(jìn)樣量為10μL，檢測(cè)模式為MRM模式。測(cè)定5mdC和dG的峰面積比。以dG為內(nèi)標(biāo)，用標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算標(biāo)本中DNA總體甲基化水平。
　　二、通過(guò)基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜法(MALDI-TOF)聯(lián)合RNA堿基特異性剪切法(MassCLEAVE)測(cè)定外周血單個(gè)核細(xì)胞中LINE-1甲基化水平，以及應(yīng)用化學(xué)發(fā)光法測(cè)定血漿總同型半胱氨酸

4、(tHcy)水平。
　　結(jié)果:
　　一、病例組38例，男女比8∶30，年齡4-18歲，對(duì)照組30例，男女比11∶19，年齡8～18歲。病例組＜12歲16例，≥12歲22例;對(duì)照組＜12歲28例，≥12歲2例。SLEDAI≥10分12例，SLEDAI＜10分26例。病例組基因組DNA甲基化水平（5.89％±0.41％）低于對(duì)照組（6.75％±0.79％），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=-5.613，P＜0.001)。病例組按＜12歲組

5、與≥12歲組組間比較，其基因組DNA甲基化水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，對(duì)照組依同樣方法分組比較，組間甲基化水平無(wú)明顯差異。分別比較兩組中男女間甲基化水平，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。SLEDAI＜10分和SLEDAI≥10分組分別與對(duì)照組比較，甲基化水平均存在差異(p＜0.001);SLEDAI＜10分和≥10分組之間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.993)。
　　二、病例組59例，男女比16∶43，年齡4-18歲，對(duì)照組47例，男女比

6、16∶31;年齡6-18歲。pSLE病例組及健康對(duì)照組的LINE-1甲基化水平分別為60.93％及62.88％，二者比較差異顯著(p=0.001)。病例組LINE-1甲基化水平與SLEDAI評(píng)分相關(guān)（r=-0.285，P=0.032）。病例組LINE-1甲基化水平與C3顯著相關(guān)(r=0.317，P=0.044)。低甲基化水平者pSLE發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)升高(AOR:14.5;95％ CI:2.8，75.6)。病例組血漿同型半胱氨酸水平顯著高于對(duì)照