1、目的：建立一種對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)進行體外分離、培養(yǎng)、擴增和鑒定的方法體系，并對其生物學特性進行觀察；BMSCs經(jīng)成骨誘導分化，鑒定其成骨能力；成骨誘導細胞與兩種不同溫度下制備而成的nHA/PCL電紡薄膜復合形成復合物，并評價細胞－材料的生物相容性，為臨床上應用組織工程骨修復骨缺損提供理論依據(jù)。
　　方法：1.在無菌條件下，取大鼠骨髓細胞，結(jié)合密度梯度離心法和貼壁培養(yǎng)法，分離大鼠BMSCs，倒置顯微鏡下觀察細胞的生

2、物學形態(tài)，流式細胞儀鑒定其表面抗原CD29、CD90及CD34，CCk－8法繪制第1代和第3代的生長曲線。2.取生長良好的第3代細胞，在地塞米松、β－磷酸甘油鈉、L－抗壞血酸的誘導培養(yǎng)下，使之向成骨細胞分化，倒置顯微鏡下觀察其形態(tài)改變。第7、10、14d，對成骨誘導的細胞進行堿性磷酸酶檢測；在第14d，對成骨誘導的細胞行von kossa礦化結(jié)節(jié)染色。3.取第3代的大鼠BMSCs，以2×105/cm2的密度接種于材料中，靜置2h后再加2

3、ml低糖DMEM/F12培養(yǎng)基(10％胎牛血清+0.1％青鏈霉素+10-7 mol/L地塞米松+10-2 mol/Lβ-磷酸甘油鈉+50mg/L的L-抗壞血酸)，于37℃、5％CO2培養(yǎng)箱常規(guī)培養(yǎng)。成骨誘導培養(yǎng)第6d、9d、14d，倒置顯微鏡大體觀察細胞-材料的復合情況。第7d，掃描電鏡觀察細胞-材料復合物的生物相容性。
　　結(jié)果：1.經(jīng)密度梯度離心和全骨髓貼壁法聯(lián)合培養(yǎng)，結(jié)合傳代所得到的細胞形態(tài)均一，呈長梭形。所分離的細胞CD2

4、9的表達率為94.97％，CD90的表達率為88.50％，CD34的表達率為2.23％。生長曲線顯示第3代細胞均有較強的增殖能力。但是，細胞傳至第8代時，其形態(tài)寬大畸形，呈樹枝狀。2.BMSCs經(jīng)成骨誘導培養(yǎng)，倒置顯微鏡下觀察，其形態(tài)學發(fā)生明顯變化，細胞體積變大，由梭形逐漸變成立方形，之后細胞體積又逐漸變小，收縮、聚集形成鈣結(jié)節(jié)。實驗組與對照組比較，堿性磷酸酶活性明顯增高，von kossa礦化結(jié)節(jié)染色呈陽性反應。3.BMSCs與支架復

5、合培養(yǎng)7 d，掃描電鏡觀察可見，大量BMSCs位于1號支架孔隙內(nèi)生長，增殖良好，細胞大多呈梭形，雙極突起，形態(tài)較佳，伸展良好，呈立體狀生長，分泌細胞外基質(zhì)，且有纖維連接蛋白生成及鈣鹽沉積。2號材料，其表面覆蓋大量細胞，材料空隙內(nèi)細胞數(shù)目較少，細胞形態(tài)大多呈圓形，伸展不完全，伸出大量偽足黏附于材料表面。
　　結(jié)論：1.采用全骨髓培養(yǎng)法和密度離心法獲取的BMSCs，運用流式細胞術鑒定BMSCs表面抗原，結(jié)合細胞形態(tài)學的觀察，證明從骨髓