1、第一部分 MALDI-TOF MS和16S rRNA序列分析在快速鑒定臨床疑難細菌中的應(yīng)用
　　目的：評價 MALDI-TOF MS和16S rRNA序列分析在快速鑒定臨床少見或疑難細菌中的應(yīng)用，提高臨床少見或疑難細菌鑒定的準確性，縮短細菌鑒定時間。
　　方法：收集2014年1月～2015年12月安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院分離自血液、痰液、分泌物、胸水及尿液等標本的臨床少見或疑難細菌90株，以16S rRNA序列分析為金標準，

2、比較MALDI-TOF MS與Vitek2 Compact鑒定系統(tǒng)鑒定的準確性及三種方法的鑒定時間。
　　結(jié)果：90株臨床少見或疑難細菌中，MALDI-TOF MS將78株（86.7％）鑒定到種水平，9株（10.0%）鑒定到屬水平，3株（3.3%）未能鑒定；Vitek2 Compact鑒定系統(tǒng)將61株（67.8%）鑒定到種水平，11株（12.2%）鑒定到屬水平，18株（20.0%）未能鑒定；90株均擴增到16S rRNA目的基因片

3、段并成功測序，86株(95.6%)鑒定到種水平，4株(4.4%)鑒定到屬水平。以16S rRNA序列分析為金標準， MALDI-TOF MS和 Vitek2 Compact鑒定系統(tǒng)正確鑒定到種水平準確性分別為85.6%（77/90）和57.8%（52/90），兩者差異有統(tǒng)計學意義（χ2=90，P=0.000）。Vitek2 Compact系統(tǒng)與MALDI-TOF MS鑒定結(jié)果在屬水平一致的有64株（71.1%），不一致的有26株（28.

4、9%）。MALDI-TOF MS、Vitek2 Compact和16S rRNA序列分析鑒定所需時間分別約為10min/株、8～12 h/株、10 h/株。
　　結(jié)論：與Vitek2 Compact鑒定系統(tǒng)相比，MALDI-TOF MS和16S rRNA序列分析對臨床少見或疑難細菌具有較好的鑒定準確性。MALDI-TOF MS鑒定時間顯著縮短，可以作為臨床微生物實驗室細菌鑒定的重要方法之一。
　　第二部分 MALDI-TOF

5、 MS和熒光定量PCR在快速鑒定腹膜透析相關(guān)性腹膜炎細菌中的應(yīng)用
　　目的：評價菌膜MALDI-TOF MS鑒定法和熒光定量PCR在快速鑒定腹膜透析相關(guān)性腹膜炎細菌中的應(yīng)用價值。
　　方法：收集安徽醫(yī)科大學第一附屬醫(yī)院2014年4月～2015年8月收治的CAPD腹膜炎患者80例，留取患者初入院經(jīng)驗性抗生素使用之前第一袋腹透液，采取以下方法：①將腹透液接種血培養(yǎng)瓶中，置于血培養(yǎng)系統(tǒng)培養(yǎng)，待血培養(yǎng)瓶報警，轉(zhuǎn)種三份哥倫比亞血液瓊脂

6、平板，第一份培養(yǎng)18～24h后，進行Vitek2 Compact系統(tǒng)鑒定；第二份培養(yǎng)8h后取菌膜進行MALDI-TOF MS鑒定；第三份培養(yǎng)24 h后進行MALDI-TOF MS鑒定做為菌膜MALDI-TOF MS鑒定方法的陽性對照。②直接提取濃縮腹透液標本DNA，應(yīng)用基于16S rRNA基因的熒光定量PCR進行細菌鑒定。比較常規(guī)血培養(yǎng)方法、菌膜MALDI-TOF MS鑒定法和熒光定量PCR從標本接收到完成鑒定結(jié)果所需時間。
　　

7、結(jié)果：①80例腹透液經(jīng)過血培養(yǎng)系統(tǒng)培養(yǎng)后，55例陽性報警，使用Vitek2 Compact系統(tǒng)能將55例均鑒定到種水平，陽性率為68.8%（55/80）；血平板培養(yǎng)8h后，55例標本均長出菌膜，MALDI-OF MS將50例成功鑒定到種水平，5例無鑒定結(jié)果，菌膜鑒定成功率為90.9%（50/55）。其中革蘭陽性菌菌膜鑒定成功率為89.7%（35/39），革蘭陰性菌菌膜鑒定成功率為93.8%（15/16）。培養(yǎng)24 h后進行MALDI-T

8、OF MS鑒定做為陽性對照，其中55例菌膜均成功鑒定到種水平，鑒定結(jié)果與 Vitek2 Compact系統(tǒng)結(jié)果一致。②熒光定量 PCR鑒定腹透液標本陽性率為86.3%（69/80），與腹透液血培養(yǎng)陽性率68.8%（55/80）相比，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=76，P=0.001）。熒光定量PCR與腹透液血培養(yǎng)鑒定法一致性為82.5%（66/80）。腹透液血培養(yǎng)常規(guī)鑒定法、培養(yǎng)8h菌膜MALDI-TOF MS鑒定方法和熒光定量PCR從標本接

9、收到完成鑒定分別需要24～48h/例，10～20h/例，2～3h/例。
　　結(jié)論：腹透液血培養(yǎng)后，接種血平板培養(yǎng)8h，刮取菌膜進行MALDI-TOF MS鑒定，該方法具有操作簡單、快速且準確的特點。熒光定量PCR方法與常規(guī)檢測方法相比，可以提高細菌檢出率，檢測腹膜炎細菌具有快速、準確、靈敏的特點，適用于腹膜透析相關(guān)性腹膜炎病因的快速篩查與及時診斷。兩種方法均是實驗室鑒定腹膜炎細菌的先進、快速而準確的選擇，各有利弊，研究者要根據(jù)實際